微小脲原体UP3-00235基因原核载体的构建表达和生物信息学分析

发布时间：2021-08-24 08:37

　　目的构建微小脲原体UP3-00235基因的原核表达载体,并对其编码蛋白质进行生物信息分析。方法利用Primer Premier 5.0软件设计引物,利用PCR方法克隆UP3-00235基因（片段大小为483bp）。使用限制性核酸内切酶双酶切UP3-00235基因和pGEX-6p-2载体质粒,室温下用T4连接酶连接2.5h,连接后转入大肠埃希菌感受态中,IPTG诱导GST-UP3-00235蛋白的表达,并对其进行生物信息学分析。结果成功构建了pGEX-6p-2-UP3-00235重组质粒,测序后与NCBI中已录入的Ureaplasma parvum strain hebnu uu3序列进行比对,同源性100%。重组质粒转染大肠埃希菌后经IPTG诱导3h,表达出GST-UP3-00235融合蛋白,与预期大致相符。经生物信息学软件分析,UP3-00235基因编码蛋白质含有160个氨基酸,分子式为C₈₂₃H₁₃₃₉N₂₄₁O₂₅₁S₃,相对分子质量为18.73×10³

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2020,15(02)北大核心CSCD

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【部分图文】：

UP3-00235基因PCR产物1%琼脂糖凝胶电泳分析

UP3-00235基因PCR产物及pGEX-6p-2载体质粒经双酶切后连接，连接产物转化大肠埃希菌XL1-Blue，在含AMP的LB固体培养基培养。对氨苄青霉素抗性初筛后生长的菌落进一步应用菌落PCR验证。菌落PCR所用引物为针对pGEX-6p-2的通用引物，扩增后经1%琼脂糖凝胶电泳，电泳结果显示扩增产物约为626bp（包括目的片段483bp，通用引物143bp），与预期大致一致（图2）。3 pGEX-6p-2-UP3-00235重组质粒测序分析

选择菌落PCR扩增阳性的菌落进一步纯培养后，送公司测序。pGEX-6p-2-UP3-00235重组质粒测序结果见图3，初步分析未见移码现象出现。进一步利用DANMAN软件对测序结果与NCBI中U.parvum strain hebnu uu3进行序列比对，同源性为100%，表明碱基序列完全正确。4 GST-UP3-00235融合蛋白的表达、纯化及SDS-PAGE鉴定

【参考文献】：
期刊论文
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[3]羊传染性胸膜肺炎支原体RPS11基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立[J]. 王璇,吴玙彤,潘淑惠,黄波,高明琴,文正常.  中国动物传染病学报. 2020(01)
[4]微小脲原体致病因素的研究进展[J]. 赵红英,汪五清.  中国皮肤性病学杂志. 2018(10)
[5]解脲脲原体UP3c0006基因原核表达载体的构建及表达[J]. 马良,宋佳欣,贾泽玮,孙浩月,李雪婷,贾天军.  中国病原生物学杂志. 2017(09)



本文编号：3359659