Sedlin蛋白与EBI3蛋白相互作用并促进EBI3蛋白的分泌
发布时间：2021-08-24 12:39
目的本文研究EBI3蛋白与Sedlin蛋白间的相互作用,利用GST Pull-down和免疫共沉淀等方法探究了EBI3蛋白以及其截短体与Sedlin蛋白在体外和哺乳动物细胞中的的相互作用情况。同时研究Sedlin和EBI3在分泌过程中的相互影响。方法制备GST-Sedlin融合蛋白,并将含有FLAG标签的EBI3、EBI3（1-135）和EBI3（125-230）的质粒分别转染至HEK 293T细胞中,利用GST Pull-down探究EBI3蛋白和其截短体EBI3（1-135）、EBI3（125-230）与Sedlin蛋白在体外相互作用以及EBI3糖基化对相互作用的影响。将含有FLAG标签的EBI3及其截短体EBI3（1-135）、EBI3（125-230）的质粒分别和含有GFP标签以及HA标签的Sedlin等质粒共同瞬时转染至至HEK 293T细胞,用免疫共沉技术探究EBI3及其截短体EBI3（1-135）、EBI3（125-230）蛋白和Sedlin蛋白在细胞内的相互作用情况。将含有FLAG标签的EBI3和含有HA标签的Sedlin的质粒瞬时转染至COS7细胞中,在细胞培养基上清...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LPS刺激巨噬细胞后的培养基上清中EBI3蛋白的检测
安徽医科大学硕士毕业论文TCAGATGACGTTTTT，Sedlin-sh1-R: AATTAAAAACGTCATCTGACATACTCGAGTATGAACTGGTTCAGATGACG; Sedlin-sh2-F：GATAATCCAAAGACGACCATCTCGAGATGGTCGTCTTTGGATTCTGClin-sh2-R: AATT AAAAA GCAGAATCCA AAGACGACCA TCTCGAGTCTTTGGATTCTGC)用慢病毒包装后，以不同的 MOI 感染 THP-1 rene 5 μg/ml)，感染 24 h 后换液，继续培养至足够细胞量后用 1 μg/m筛选，筛选 48 h 后换液收细胞 Western blot 检测。结果表明感染后A3-Sedlin MOI=10 组的 Sedlin 被明显敲低，将对应的细胞继续培养并 Sedlin 蛋白的 THP-1 细胞株。
本文编号：3360007
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LPS刺激巨噬细胞后的培养基上清中EBI3蛋白的检测
安徽医科大学硕士毕业论文TCAGATGACGTTTTT，Sedlin-sh1-R: AATTAAAAACGTCATCTGACATACTCGAGTATGAACTGGTTCAGATGACG; Sedlin-sh2-F：GATAATCCAAAGACGACCATCTCGAGATGGTCGTCTTTGGATTCTGClin-sh2-R: AATT AAAAA GCAGAATCCA AAGACGACCA TCTCGAGTCTTTGGATTCTGC)用慢病毒包装后，以不同的 MOI 感染 THP-1 rene 5 μg/ml)，感染 24 h 后换液，继续培养至足够细胞量后用 1 μg/m筛选，筛选 48 h 后换液收细胞 Western blot 检测。结果表明感染后A3-Sedlin MOI=10 组的 Sedlin 被明显敲低，将对应的细胞继续培养并 Sedlin 蛋白的 THP-1 细胞株。
本文编号：3360007
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