抗H7N9亚型流感病毒神经氨酸酶嵌合抗体的制备及初步鉴定
发布时间：2021-08-24 10:00
目的:制备靶向H7N9神经氨酸酶（Neuraminidase,NA）的嵌合抗体,对其功能特性进行初步鉴定,为H7N9的预防控制提供理论依据。方法:根据鼠源抗N9 MAb原始信息,挑选8株特异性靶向流感病毒A/Anhui/1/2013（H7N9）NA的杂交瘤细胞株,使用基因工程技术对其进行人源化改造并获得嵌合抗体,通过ELISA,BLI,FACS,HI,NI,微量中和实验,ADCC,空斑实验及竞争ELISA一系列实验技术对获得嵌合抗体活性及功能进行鉴定。结果:获得了三株特异性抗H7N9亚型流感病毒N9嵌合抗体1E2,3E3及5D1,对AH-N9蛋白的EC50值分别为0.048μg/ml,0.028μg/ml和0.675μg/ml;其中1E2和3E3对AH-N9蛋白具有极强的亲和力,KD值达p M;1E2和3E3具有相似的抗原结合部位并与5D1的抗原识别表位不同;三株嵌合抗体都能不同程度抑制NA酶活及耐药N9神经氨酸酶活,其中3E3 NA酶活抑制能力最强,体外细胞实验中只有1E2和3E3两株嵌合抗体可以抑制病毒释放,阻止病毒进一步感染细胞,其中3E3对病毒的抑制性最强。结论:本研究构建的三...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
抗体轻链基因2ndPCR产物琼脂糖凝胶电泳图,从左至右分别为3C1，3E3，5D1，
图 3.2 抗体重链基因 2nd PCR 产物琼脂糖凝胶电泳图,从左至右分别为 3C1，3E3，5D1，2A8，Marker，1E2，1G8，3B9，5D5，Marker表 3.1 嵌合抗体的重链基因信息杂交瘤细胞株克隆编号质粒编号 VH 片段V 片段变异度(%)DH 片段 JH 片段JH 片段变异度(%)CDR残基数3C1 3C1 - VH1MusmusIGHV1S34*01 F 5 -MusmusIGHJ4*01 F 7.41 8.8.X3E3 3E3 - VH1MusmusIGHV1S34*01 F 4.46 -MusmusIGHJ2*01 F 4.17 8.8.105D15D1 - VH1MusmusIGHV1-18*01 F 7.64MusmusIGHD2-1*01 FMusmusIGHJ4*01 F 1.85 8.8.145D1 - VH2MusmusIGHV1S135*01[F] 8.33MusmusIGHD4-1*01 FMusmusIGHJ2*01 F 0 8.8.145D1 - VH3MusmusIGHV1-14*01 F 3.12MusmusIGHD4-1*01 FMusmusIGHJ4*01 F 4.7 8.8.142A8 2A8 - VH3MusmusMusmusMusmus
我们可以看出三株嵌合抗体均不能抑制病毒释放并减小空斑直径大小。（5）我们通过12孔板空斑实验，判断三株嵌合抗体与感染RG267-H7N9后的MDCK细胞共同孵育后是否能够减少斑块数量。从图3.6-A，B我们可以得出在高3.7 微量中和实验结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]2017-2018年河南省流感病毒对神经氨酸酶抑制剂药物的耐药性研究[J]. 赵升,僧明华,吕宛玉,杨建辉,张新,徐瑾. 中华疾病控制杂志. 2019(03)
[2]人用H7N9禽流感灭活疫苗免疫效果评价的Meta分析[J]. 伍小雪,苟晓琴,石渝,张柯,钱媛,苏敏,黄俊琼. 预防医学. 2019(03)
[3]人感染H7N9禽流感流行病学与预防控制研究进展[J]. 刘丽丽. 中国社区医师. 2019(01)
[4]人用H7N9禽流感病毒疫苗临床研究进展及预防控制[J]. 伍小雪,黄俊琼. 齐齐哈尔医学院学报. 2018(23)
[5]H7N9禽流感病毒及其高致病性的研究进展[J]. 苟晓琴,黄俊琼. 海南医学. 2018(23)
[6]H7N9流感病毒研究进展及防控措施[J]. 任雪枫,祝培波. 当代畜禽养殖业. 2018(12)
[7]广东省佛山市活禽交易市场中不同休市时间对环境中H7亚型禽流感病毒污染水平的影响[J]. 杨泽锋,梁自勉,黄嘉殷,张敏. 医学动物防制. 2018(12)
[8]广州市禽类交易区休市前后禽流感病毒动态监测[J]. 曹蓝,刘艳慧,陈艺韵,马钰,夏丹,李魁彪,陆剑云,狄飚,鲁恩洁. 中华疾病控制杂志. 2018(06)
[9]广东省广州市活禽批发市场从业人员H7N9流感“知信行”现状调查[J]. 陈裕华,沈丹,朱建翠,于飞,黄森,王令,张海明,何日文. 中国动物检疫. 2018(02)
[10]深圳市禽职业暴露人群感染H7N9禽流感病毒血清学调查[J]. 王昕,房师松,刘慧,武伟华,彭博,耿艺介,唐秀娟. 职业与健康. 2018(03)
博士论文
[1]新型流感病毒神经氨酸酶抑制剂的设计、合成与初步活性研究[D]. 刘瑜.山东大学 2011
硕士论文
[1]来源于H5N1禽流感患者的广谱抗血凝素蛋白抗体筛选及其功能研究[D]. 孙颖.中国疾病预防控制中心 2018
[2]H7N9亚型禽流感病毒血凝素特异性单克隆抗体的制备及鉴定[D]. 程道承.扬州大学 2018
[3]H7N9流感病毒神经氨酸酶特异性单克隆抗体的制备及其应用研究[D]. 于悦洋.中国疾病预防控制中心 2017
[4]不同频次消毒对活禽市场禽流感病毒的影响[D]. 谷苗苗.南昌大学 2017
[5]H7亚型禽流感病毒HA蛋白及N1、N9亚型NA蛋白单克隆抗体的制备[D]. 陈思.中国农业科学院 2017
[6]20例H7N9禽流感患者的临床特点及预后分析[D]. 万道谋.南昌大学 2017
[7]神经氨酸酶抑制剂的抗流感活性研究[D]. 曾雄飞.天津科技大学 2016
[8]针对禽流感N5、N8、N9三种神经氨酸酶NA蛋白单克隆抗体及N5胶体金试纸条的研制[D]. 尹颖.扬州大学 2016
[9]人群血清中抗流感病毒中国流行株抗体水平研究[D]. 郭琦.北京协和医学院 2015
本文编号：3359776
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
抗体轻链基因2ndPCR产物琼脂糖凝胶电泳图,从左至右分别为3C1，3E3，5D1，
图 3.2 抗体重链基因 2nd PCR 产物琼脂糖凝胶电泳图,从左至右分别为 3C1，3E3，5D1，2A8，Marker，1E2，1G8，3B9，5D5，Marker表 3.1 嵌合抗体的重链基因信息杂交瘤细胞株克隆编号质粒编号 VH 片段V 片段变异度(%)DH 片段 JH 片段JH 片段变异度(%)CDR残基数3C1 3C1 - VH1MusmusIGHV1S34*01 F 5 -MusmusIGHJ4*01 F 7.41 8.8.X3E3 3E3 - VH1MusmusIGHV1S34*01 F 4.46 -MusmusIGHJ2*01 F 4.17 8.8.105D15D1 - VH1MusmusIGHV1-18*01 F 7.64MusmusIGHD2-1*01 FMusmusIGHJ4*01 F 1.85 8.8.145D1 - VH2MusmusIGHV1S135*01[F] 8.33MusmusIGHD4-1*01 FMusmusIGHJ2*01 F 0 8.8.145D1 - VH3MusmusIGHV1-14*01 F 3.12MusmusIGHD4-1*01 FMusmusIGHJ4*01 F 4.7 8.8.142A8 2A8 - VH3MusmusMusmusMusmus
我们可以看出三株嵌合抗体均不能抑制病毒释放并减小空斑直径大小。（5）我们通过12孔板空斑实验，判断三株嵌合抗体与感染RG267-H7N9后的MDCK细胞共同孵育后是否能够减少斑块数量。从图3.6-A，B我们可以得出在高3.7 微量中和实验结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]2017-2018年河南省流感病毒对神经氨酸酶抑制剂药物的耐药性研究[J]. 赵升,僧明华,吕宛玉,杨建辉,张新,徐瑾. 中华疾病控制杂志. 2019(03)
[2]人用H7N9禽流感灭活疫苗免疫效果评价的Meta分析[J]. 伍小雪,苟晓琴,石渝,张柯,钱媛,苏敏,黄俊琼. 预防医学. 2019(03)
[3]人感染H7N9禽流感流行病学与预防控制研究进展[J]. 刘丽丽. 中国社区医师. 2019(01)
[4]人用H7N9禽流感病毒疫苗临床研究进展及预防控制[J]. 伍小雪,黄俊琼. 齐齐哈尔医学院学报. 2018(23)
[5]H7N9禽流感病毒及其高致病性的研究进展[J]. 苟晓琴,黄俊琼. 海南医学. 2018(23)
[6]H7N9流感病毒研究进展及防控措施[J]. 任雪枫,祝培波. 当代畜禽养殖业. 2018(12)
[7]广东省佛山市活禽交易市场中不同休市时间对环境中H7亚型禽流感病毒污染水平的影响[J]. 杨泽锋,梁自勉,黄嘉殷,张敏. 医学动物防制. 2018(12)
[8]广州市禽类交易区休市前后禽流感病毒动态监测[J]. 曹蓝,刘艳慧,陈艺韵,马钰,夏丹,李魁彪,陆剑云,狄飚,鲁恩洁. 中华疾病控制杂志. 2018(06)
[9]广东省广州市活禽批发市场从业人员H7N9流感“知信行”现状调查[J]. 陈裕华,沈丹,朱建翠,于飞,黄森,王令,张海明,何日文. 中国动物检疫. 2018(02)
[10]深圳市禽职业暴露人群感染H7N9禽流感病毒血清学调查[J]. 王昕,房师松,刘慧,武伟华,彭博,耿艺介,唐秀娟. 职业与健康. 2018(03)
博士论文
[1]新型流感病毒神经氨酸酶抑制剂的设计、合成与初步活性研究[D]. 刘瑜.山东大学 2011
硕士论文
[1]来源于H5N1禽流感患者的广谱抗血凝素蛋白抗体筛选及其功能研究[D]. 孙颖.中国疾病预防控制中心 2018
[2]H7N9亚型禽流感病毒血凝素特异性单克隆抗体的制备及鉴定[D]. 程道承.扬州大学 2018
[3]H7N9流感病毒神经氨酸酶特异性单克隆抗体的制备及其应用研究[D]. 于悦洋.中国疾病预防控制中心 2017
[4]不同频次消毒对活禽市场禽流感病毒的影响[D]. 谷苗苗.南昌大学 2017
[5]H7亚型禽流感病毒HA蛋白及N1、N9亚型NA蛋白单克隆抗体的制备[D]. 陈思.中国农业科学院 2017
[6]20例H7N9禽流感患者的临床特点及预后分析[D]. 万道谋.南昌大学 2017
[7]神经氨酸酶抑制剂的抗流感活性研究[D]. 曾雄飞.天津科技大学 2016
[8]针对禽流感N5、N8、N9三种神经氨酸酶NA蛋白单克隆抗体及N5胶体金试纸条的研制[D]. 尹颖.扬州大学 2016
[9]人群血清中抗流感病毒中国流行株抗体水平研究[D]. 郭琦.北京协和医学院 2015
本文编号：3359776
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