肺炎克雷伯菌FimA的表达纯化及多克隆抗体的制备

发布时间：2021-09-03 10:22

　　目的表达及纯化肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）菌毛FimA蛋白并制备多克隆抗体。方法在Clustal Omega网站上比对不同细菌FimA蛋白的同源性。设计特异引物,PCR扩增肺炎克雷伯菌FimA基因,双酶切后将其连接到表达质粒pET28a,构建重组质粒pET28a-FimA。将pET28a-FimA转化表达菌BL21 star（DE3）后培养,使用IPTG诱导FimA蛋白表达。使用IEDG在线网站分析FimA蛋白的B细胞表位,然后用层析纯化的重组FimA蛋白免疫小鼠,获得免疫血清,ELISA检测IgG、IgG1、IgG2a和IgA。结果肺炎克雷伯菌的FimA与其他FimA蛋白同源性较低,为23.6%～30.6%。构建的重组质粒pET28a-FimA在大肠埃希菌中能表达21.6×10³的重组FimA蛋白,经亲和层析后得到单一电泳条带的高纯度目的蛋白。用FimA蛋白免疫小鼠,获得高滴度的IgG和IgA,且IgG2a的A₄₅₀值高于IgG1。结论成功构建了表达质粒pET28a-FimA,获得高纯度的重组蛋白FimA。Fi... 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2020,15(01)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

不同细菌的FimA蛋白氨基酸序列比较

提取肺炎克雷伯菌基因组DNA,使用特异性引物PCR扩增得到约为570 bp的FimA基因片段(图2)。回收FimA基因PCR产物,使用NdeI和HindIII双酶切后与同样酶切的pET28a连接,连接产物转化大肠埃希菌DH5α。经PCR和测序验证重组质粒pET28a-FimA构建正确(图2)。3 重组FimA蛋白的表达及纯化

使用IEBD在线网站分析FimA蛋白的B细胞表位,有5处可能形成表位(图4),其氨基酸序列和在蛋白中的位置见表1。图4 IEBD预测FimA蛋白的B细胞表位

【参考文献】：
期刊论文
[1]血流感染高致病性肺炎克雷伯菌毒力因子及分子分型特点分析[J]. 林佛君,胥志超,林志伟,郑金鑫,陈重,程航,徐广健,韩雪莹,张波,余治健,邓启文.  中国病原生物学杂志. 2018(04)
[2]肺炎克雷伯菌菌毛的研究进展[J]. 王欢欢,宋超,何海洋,林吾烨,刘新.  中国微生态学杂志. 2015(12)



本文编号：3380936