激素抵抗型哮喘小鼠动物模型建立的实验性研究

发布时间：2017-05-01 17:02

  本文关键词：激素抵抗型哮喘小鼠动物模型建立的实验性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本实验拟探索有效建立激素抵抗型支气管哮喘小鼠动物模型的方法。方法:普通级BALB/C雌性小鼠30只,随机分为正常对照(NC)组、支气管哮喘未治疗(NTA)组、激素敏感型哮喘(SSA)组、气道重塑(AR)组及激素抵抗型哮喘(SRA)组5组,每组6只。NC组未予任何处理,直接处死。NTA组、SSA组、AR组及SRA组小鼠分别于实验第0天、7天和14天各腹腔注射50μg卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)和2mg氢氧化铝(Aluminum hydroxide,AL(OH)3)联合致敏。从实验第21天起,四组小鼠均采用1%0VA溶液进行雾化吸入激发,每天雾化30min,连续雾化5天。SSA组小鼠于第二次雾化前30分钟腹腔注射地塞米松(dexamethasone,DEX)(2mg/kg),连续2天。AR组及SRA组小鼠连续雾化9周。SRA组小鼠参照SSA组处理,每周第二次OVA溶液雾化前30分钟腹腔注射DEX(2mg/kg),每周连续2天,连续9周。NTA组、AR组分别用0.9%生理盐水代替地塞米松雾化前30分钟腹腔注射。于末次雾化结束24小时后处死小鼠,收集肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)行细胞计数,肺组织病理切片分类计数浸润有核活细胞,图像分析系统分析气道壁及平滑肌形态。结果:四组造模组小鼠均于首次雾化时即出现全身骚扰等哮喘症状,随着雾化次数的增加,AR、SRA组小鼠症状逐渐加重,且SRA组对DEX的治疗反应性呈现出下降的趋势,自雾化第6周开始两组小鼠出现持续性喘息,此时DEX已完全不能缓解SRA组小鼠喘息症状。NTA组肺内支气管上皮细胞脱落,黏膜中断,杯状细胞顶部空泡化,支气管粘膜下及肺实质血管旁可见明显多种炎症细胞浸润。SSA组肺内支气管黏膜完整,杯状细胞顶部空泡化及炎症细胞浸润均明显轻于NTA组。AR、SRA组肺内支气管皱襞增多,上皮细胞明显增生紊乱,管腔狭窄,呼吸道及血管平滑肌细胞增生,肺内见大量炎性细胞浸润。SRA组更可见部分肺叶内肺泡破裂融合,肺大泡形成。NTA组、AR组及SRA组小鼠BALF细胞总数均显著高于正常对照组(NC组)(P0.01),四组哮喘小鼠肺内嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数及气道壁、气道平滑肌厚度均显著高于NC组(P0.05),SRA组小鼠BALF浸润细胞总数、肺内嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润数及气道壁、气道平滑肌增厚程度均较SSA组严重(P0.01),AR组小鼠BALF细胞总数及气道壁、气道平滑肌厚度均显著高于NTA组(P0.05),SRA组小鼠与AR组比较,仅肺内嗜酸性粒细胞数升高显著(P0.01)。结论:1.激素可以减少哮喘肺组织嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润,但对中性粒细胞浸润影响不大。2.反复的抗原刺激联合激素中断性治疗可以引起嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润增加,引起气道重塑及肺组织结构损害,导致激素抵抗型哮喘对激素敏感性下降,导致激素抵抗。3.SRA组小鼠处死前已表现出对DEX治疗反应的失效甚至恶化,肺组织病理观察到显著的炎症细胞浸润(以嗜酸性粒细胞、中性粒细胞为主)以及气道重塑,因此本实验建立激素抵抗型哮喘小鼠动物模型的方法切实可行。
【关键词】：支气管哮喘 小鼠模型 激素类 气道重塑
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562.25;R-332
【目录】：

• 附录4-6
• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-15
• 材料与和方法15-22
• 1.材料15-16
• 1.1 实验动物15
• 1.2 主要试剂15
• 1.3 主要仪器15-16
• 2.方法16-22
• 2.1 主要试剂的配制16-17
• 2.2 造模方法17-19
• 2.3 标本收集及指标检测19-21
• 2.4 统计学分析21-22
• 结果22-27
• 1.一般情况观察22
• 2.肺泡灌洗液活细胞计数22-23
• 3.肺脏大体观及肺组织病理切片23-26
• 3.1 肺脏大体观23
• 3.2 肺组织病理形态学改变23-25
• 3.3 肺组织病理切片细胞分类计数25-26
• 4.肺组织计算机图像分析26-27
• 讨论27-32
• 结论32-33
• 参考文献33-38
• 综述38-48
• 参考文献44-48
• 致谢48

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