河弧菌paar基因功能研究

发布时间：2021-09-15 13:15

　　目的研究河弧菌85003 VI型分泌系统VflT6SS2核心基因簇上游paar基因（AL536_RS29530）编码蛋白的结构特征、功能及其对河弧菌VflT6SS2功能的影响。方法利用自杀质粒介导的同源重组技术构建paar基因缺失株,PCR扩增并克隆paar基因于pSRKTc表达载体获得回补质粒,导入相应缺失株得到回补株。Western Blot（WB）检测缺失株和回补株中T6SS效应蛋白Hcp的表达和分泌,细菌杀菌实验检测菌株杀菌毒力变化。荧光定量反转录聚合酶链式反应检测tssB2和hcp mRNA表达水平。启动子-Lux报告系统的冷光表型检测确定VflT6SS2核心基因簇启动子及hcp启动子在野生株和缺失株背景下的活性差异。结果成功构建河弧菌85003的paar基因的精确缺失株和相应的回补株;WB检测缺失株中Hcp的表达和分泌较野生株明显降低,同时其对大肠埃希菌的菌间杀伤能力也降低,导入相应回补质粒可使缺失株Hcp的表达、分泌和杀菌表型恢复到野生株水平;hcp和tssB2的mRNA水平检测显示缺失株低于野生株,差异有显著性,但VflT6SS2核心基因簇的启动子活... 

【文章来源】：疾病监测. 2020,35(04)

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

菌体沉淀和培养上清中Hcp蛋白的注：WT.野生型

河弧菌85003与大肠埃希菌MG1655的细菌竞争Figure3CompetitionbetweenV.fluvialisstrain注：a.P＜

野生株和缺失株中重组报告质粒冷光活性分析注：A.质粒ptssD2a-lux；B.质粒ptssD2b-lux；C.质粒pVflT6SS2-lux；WT.野生型

【参考文献】：
硕士论文
[1]河弧菌Ⅵ型分泌系统的初步分析[D]. 赵萌.中国疾病预防控制中心 2015



本文编号：3396148