基于RNA-Seq技术分析藻蓝蛋白对自然衰老小鼠卵巢功能恢复的机理研究

发布时间：2021-09-23 14:13

　　对于成年女性而言,其生育力随年龄增长而下降。其中卵巢衰老,包括卵泡在数量上的减少和功能上的衰退等,成为生育力下降的重要原因。挽救衰老的卵巢,是提高女性生殖力的一个重要策略。藻蓝蛋白（C-Phycocyanin,PC）是一种具有抗氧化、抗炎症、增强免疫力的钝顶螺旋藻类蛋白质,在医学和生物领域具有广泛应用价值。我们的前期研究利用D-半乳糖（D-Galactose,D-gal）致衰小鼠模型,表明PC可通过抑制活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）途径改善致衰小鼠卵巢功能;进一步又通过转录组测序（RNA-Sequencing,RNA-Seq）技术筛选到致衰组和致衰改善组差异表达基因提高生殖力的富集通路。但在自然衰老小鼠模型中,PC能否改善雌性生殖力,以及PC的作用功效和机制尚未得知。本研究取6周龄小鼠为年轻组（Young）,8.5月龄小鼠为自然衰老组（Aged）,灌胃PC的8.5月龄小鼠为处理组（Aged+PC）,小鼠品系均为ICR。经45天灌胃处理后,利用RNA-Seq技术,分析卵巢在转录组水平表达变化,得到以下结论:（1）高通量二代测序获得Young组、Aged组... 

【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校

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【学位级别】：硕士

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实验技术路线图

杜志锋 基于 RNA-Seq 技术分析藻蓝蛋白对自然衰老小鼠卵巢功能恢复的机理研究技有限公司）。其实验流程如下（图 2.2）：首先用带有 Oligo(dT)的磁珠富集小鼠卵巢 mRNA，用试剂盒去除其 rRNA的。加入 Fragmentation Buffer 使其片断成为 200-700 nt 的短片段。以片断后的 mRNA 为模板，用六碱基随机引物(Random hexamers)合成 cD入缓冲液, dNTPs, RNaseH 和 DNAPolymerase I 合成 cDNA 第二链。经过 QIAQuick PCR 试剂盒纯化并加 EB 缓冲液洗脱。洗脱纯化后的双链 cDNA 再进行末端修复、加碱基 A、加测序接头处理。经琼脂糖凝胶电泳回收目的大小片段并进行PCR扩增，从而完成整个文库制构建好的文库用 Illumina HiSeqXTen 测序仪进行测序，其策略为 PE150。

内蒙古大学 硕士学位论文）数据比对分析：主要是针对比对到基因组中的序列，根据不同的基因组注分类和特征分析，并计算相应的表达量。）转录组深层分析：包括进行差异表达分析，常规转录组分析中还有可变剪本预测和变异分析深层分析及其他个性化分析。息分析流程图如下：


本文编号：3405852