钙反应性反式激活子（CREST）通过增加微管稳定性和动态组装促进神经突起生长
发布时间：2021-09-28 13:08
钙反应性反式激活子（calcium-responsive transactivator,CREST）是神经发育过程中分裂后神经元内高水平表达的一种核蛋白,通过调节钙依赖性的基因转录影响神经元树突的发育,参与维持成熟神经元的形态。缺乏CREST的基因敲除小鼠表现出明显的运动障碍、树突生长异常和分支减少。我们实验室的前期研究发现,无血清培养基诱导小鼠成神经瘤母细胞（N2a细胞）分化过程中CREST表达增加,并呈颗粒状分布于细胞质中,过表达CREST可通过激活神经元分化相关基因的转录,进而促进神经突起的生长和神经元的分化。神经元分化建立在神经突起（轴突、树突）的生长和分支的基础上。神经突起内部微管的组装和延伸是神经突起生长的骨架支撑,微管发育的缺陷会引起神经系统形态和功能异常。神经突起的形成和生长依赖于多种微管相互作用蛋白对微管骨架稳定性和动态性的协同调节,它们通过与微管骨架结合,调节微管的组装、稳定、解聚或断裂。CREST在神经元分化过程中出现的细胞质颗粒状分布现象提示其可能存在着胞质功能,通过对微管骨架的直接影响调节神经突起的生长。本研究利用免疫荧光和免疫共沉淀实验分析了CREST与α-...
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CREST与α-tubulin及微管骨架的空间共定位关系
中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 确上述的共定位关系是否建立在 CREST 与 α-tubulin 蛋，我们通过 Co-IP 实验对出生后一周的小鼠大脑皮质和a 细胞中二者的结合关系进行了检测。在大脑皮质（图 （图 2 B）中，内源性 CREST 与 α-tubulin 均存在相互作作用蛋白 CBP[39]和微管相关蛋白 Map2[40]作为阳性对照同种属来源的 IgG作为阴性对照）。
24图 4. 改变 CREST 表达水平对微管稳定性影响分析。A，含 5% FBS 培养的 N2a 细胞、无血清培养诱导分化的 N2a 细胞、转染 CREST 质粒和对照质粒的 N2a 细胞培养 48 h 后，免疫荧光显示微管蛋白的空间分布和组装情况。比例尺=10 μm（方框内放大图比例尺=5μm）；B，5% FBS 培养的 N2a 细胞和无血清培养诱导分化的 N2a 细胞、转染 pCMV-HA-CREST 质粒和对照质粒的 N2a 细胞、无血清培养诱导分化条件下转染 CREST-SiRNA 和对照 RNA 的 N2a 细胞，培养 48 h 后，Western blot 检测 CREST、α-tubulin、Acetyl-α-tubulin、Detyr-α-tubulin 的表达水平；C、D，图 B 中 α-tubulin 乙酰化和去酪氨酸修饰水平变化的统计学分析，*表示与对照组[FBS(+)]比较，0.01<P<0.05（n=3）；**表示与对照组[FBS(+)]比较，0.001<P<0.01（n=3）；#表示与对照组[FBS(+)+ Vector]比较，0.01<P<0.05
【参考文献】：
期刊论文
[1]无血清培养上调N2a细胞钙反应性反式激活因子的表达[J]. 王巧真,金真真,彭挺,管英俊,李和. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2012(05)
[2]Effect of amyloid peptides on serum withdrawal-induced cell differentiation and cell viability[J]. Yi Peng WANG, Ze Fen WANG, Ying Chun ZHANG, Qing TIAN, Jian Zhi WANG Department of Pathophysiology, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, 430030, China. Cell Research. 2004(06)
博士论文
[1]钙反应性反式激活子CREST通过p300调节p53乙酰化促进神经细胞分化[D]. 曹丽颖.华中科技大学 2018
本文编号：3411959
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CREST与α-tubulin及微管骨架的空间共定位关系
中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 确上述的共定位关系是否建立在 CREST 与 α-tubulin 蛋，我们通过 Co-IP 实验对出生后一周的小鼠大脑皮质和a 细胞中二者的结合关系进行了检测。在大脑皮质（图 （图 2 B）中，内源性 CREST 与 α-tubulin 均存在相互作作用蛋白 CBP[39]和微管相关蛋白 Map2[40]作为阳性对照同种属来源的 IgG作为阴性对照）。
24图 4. 改变 CREST 表达水平对微管稳定性影响分析。A，含 5% FBS 培养的 N2a 细胞、无血清培养诱导分化的 N2a 细胞、转染 CREST 质粒和对照质粒的 N2a 细胞培养 48 h 后，免疫荧光显示微管蛋白的空间分布和组装情况。比例尺=10 μm（方框内放大图比例尺=5μm）；B，5% FBS 培养的 N2a 细胞和无血清培养诱导分化的 N2a 细胞、转染 pCMV-HA-CREST 质粒和对照质粒的 N2a 细胞、无血清培养诱导分化条件下转染 CREST-SiRNA 和对照 RNA 的 N2a 细胞，培养 48 h 后，Western blot 检测 CREST、α-tubulin、Acetyl-α-tubulin、Detyr-α-tubulin 的表达水平；C、D，图 B 中 α-tubulin 乙酰化和去酪氨酸修饰水平变化的统计学分析，*表示与对照组[FBS(+)]比较，0.01<P<0.05（n=3）；**表示与对照组[FBS(+)]比较，0.001<P<0.01（n=3）；#表示与对照组[FBS(+)+ Vector]比较，0.01<P<0.05
【参考文献】：
期刊论文
[1]无血清培养上调N2a细胞钙反应性反式激活因子的表达[J]. 王巧真,金真真,彭挺,管英俊,李和. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2012(05)
[2]Effect of amyloid peptides on serum withdrawal-induced cell differentiation and cell viability[J]. Yi Peng WANG, Ze Fen WANG, Ying Chun ZHANG, Qing TIAN, Jian Zhi WANG Department of Pathophysiology, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, 430030, China. Cell Research. 2004(06)
博士论文
[1]钙反应性反式激活子CREST通过p300调节p53乙酰化促进神经细胞分化[D]. 曹丽颖.华中科技大学 2018
本文编号：3411959
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/3411959.html
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