树突状细胞通过NT-3/TrkC信号通路调控神经干细胞存活的体外研究
发布时间：2021-10-05 10:29
目的研究共培养状态下树突状细胞（dendritic cell,DC）对神经干细胞（neural stem cell,NSC）存活的影响及其作用机制。方法体外分离、纯化SD大鼠原代DC和NSC,将二者用Transwell技术共培养,用NT-3特异性抗体中和NT-3的表达;然后采用qRT-PCR方法检测DC中神经营养素-3（neurotrophin-3,NT-3）的mRNA水平,流式细胞术检测NSC凋亡;同时用免疫荧光、Western blot技术确定NSC表面NT-3特异性受体Trk C的表达。结果与DC单独培养组相比,共培养体系中,DC表达NT-3水平显著性增强（P<0.05）;同时共培养能显著增加NSC存活,该效应能被NT-3特异性中和性抗体阻断;共培养能够增加NSC中NT-3特异性受体TrkC表达（P<0.05）,并上调TrkC磷酸化水平,而NT-3特异性抗体能够抑制TrkC表达和磷酸化上调（P<0.05）。结论 DC和NSC共培养能够增加DC中NT-3表达,高表达的NT-3则通过NSC膜上的TrkC受体促进NSC的存活。
【文章来源】：第三军医大学学报. 2013,35(12)北大核心CSCD
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
激光共聚焦显微镜观察共培养对NSC的TrkC表达的影响
-PCR结果显示，与DC共培养能够显著增加NSC中TrkC的表达，即NSC/DC组NSC的TrkCmRNA水平(1．254±0.062)较NSC组(1．002±0．087)显著增高(P＜0.05);NSC/DC+NT-3抗体组TrkCmRNA表达(0．607±0．102)低于NSC/DC组(P＜0.05)，显示NT-3抗体能够阻断NSC/DC共培养TrkCmRNA的上调作用。Westernblot证实在蛋白水平具有同样效应［NSC/DC组、NSC组、NSC/DC+NT-3抗体组分别为(1．148±0．038)、(0．912±0．068)、(0．682±0．087)，图2］。TrkC→GAPDH→←94×103←36×1031231:NSC/DC组;2:NSC组;3:NSC/DC+NT-3抗体组图2Westernblot检测各组NSC的TrkC蛋白的表达2．4与DC共培养促进NSC中TrkC磷酸化Westernblot检测发现NSC/DC组p-TrkC水平(1．100±0.162)高于其余两组［NSC组、NSC/DC+NT-3抗体组分别为(0．651±0．052)、(0．392±0．066)，P＜0.05］，且变化趋势同TrkC相似(图3)。p鄄TrkC→GAPDH→←220×103←36×1031231:NSC/DC组;2:NSC组;3:NSC/DC+NT-3抗体组图3Westernblot检测各组NSC的p-TrkC蛋白的表达3讨论神经干细胞具有促进脊髓损伤修复的能力［12］，但是单独移植神经干细胞的存活和分化非常有限，主要原因在于局部的抑制性微环境不利于其存活和分化，故而目前多采用干细胞联合神经营养策略，如增加局部NT-3、BDNF［4］，或者联合移植具有神经营养作用的细胞［5］以改善局部微环境。本实验证实DC和NSC共培养能够增加DC中NT-3表达，并转而上调NSC中NT-3特异性受体TrkC表达，促进NSC存活;在共培养体系中使用NT-3特异性中和抗体能够选择性阻断该效应，并下调p-TrkC水平，表明该作用是通过NT-3/TrkC途径而实现。现已证实，树突状细胞在受到外界抗原刺激时能增加包括NT-3、BDNF在内的多种神经?
(1．148±0．038)、(0．912±0．068)、(0．682±0．087)，图2］。TrkC→GAPDH→←94×103←36×1031231:NSC/DC组;2:NSC组;3:NSC/DC+NT-3抗体组图2Westernblot检测各组NSC的TrkC蛋白的表达2．4与DC共培养促进NSC中TrkC磷酸化Westernblot检测发现NSC/DC组p-TrkC水平(1．100±0.162)高于其余两组［NSC组、NSC/DC+NT-3抗体组分别为(0．651±0．052)、(0．392±0．066)，P＜0.05］，且变化趋势同TrkC相似(图3)。p鄄TrkC→GAPDH→←220×103←36×1031231:NSC/DC组;2:NSC组;3:NSC/DC+NT-3抗体组图3Westernblot检测各组NSC的p-TrkC蛋白的表达3讨论神经干细胞具有促进脊髓损伤修复的能力［12］，但是单独移植神经干细胞的存活和分化非常有限，主要原因在于局部的抑制性微环境不利于其存活和分化，故而目前多采用干细胞联合神经营养策略，如增加局部NT-3、BDNF［4］，或者联合移植具有神经营养作用的细胞［5］以改善局部微环境。本实验证实DC和NSC共培养能够增加DC中NT-3表达，并转而上调NSC中NT-3特异性受体TrkC表达，促进NSC存活;在共培养体系中使用NT-3特异性中和抗体能够选择性阻断该效应，并下调p-TrkC水平，表明该作用是通过NT-3/TrkC途径而实现。现已证实，树突状细胞在受到外界抗原刺激时能增加包括NT-3、BDNF在内的多种神经营养因子的表达［9，13］，表明该体系中，神经干细胞或相关因素可能作为抗原性物质刺激树突状细胞而促进其1190第35卷第12期2013年6月30日第三军医大学学报JThirdMilMedUnivVol．35，No．12Jun．302013
【参考文献】：
期刊论文
[1]体外树突状细胞通过NT-3上调P-ERK1/2的表达促进神经干/祖细胞分化[J]. 陈太邦,赵建华,王永飞,王钟,郭乔楠. 第三军医大学学报. 2012(23)
[2]DCs和NSPCs共培养促进NSPCs增殖及其机制的初步研究[J]. 王永飞,赵建华,晁瑞,陈太邦,郭乔楠. 第三军医大学学报. 2012(05)
[3]树突细胞及神经干细胞/前体细胞联合移植促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复[J]. 晁瑞,赵建华,刘明永,王永飞,郭乔楠. 第三军医大学学报. 2011(10)
本文编号：3419556
【文章来源】：第三军医大学学报. 2013,35(12)北大核心CSCD
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
激光共聚焦显微镜观察共培养对NSC的TrkC表达的影响
-PCR结果显示，与DC共培养能够显著增加NSC中TrkC的表达，即NSC/DC组NSC的TrkCmRNA水平(1．254±0.062)较NSC组(1．002±0．087)显著增高(P＜0.05);NSC/DC+NT-3抗体组TrkCmRNA表达(0．607±0．102)低于NSC/DC组(P＜0.05)，显示NT-3抗体能够阻断NSC/DC共培养TrkCmRNA的上调作用。Westernblot证实在蛋白水平具有同样效应［NSC/DC组、NSC组、NSC/DC+NT-3抗体组分别为(1．148±0．038)、(0．912±0．068)、(0．682±0．087)，图2］。TrkC→GAPDH→←94×103←36×1031231:NSC/DC组;2:NSC组;3:NSC/DC+NT-3抗体组图2Westernblot检测各组NSC的TrkC蛋白的表达2．4与DC共培养促进NSC中TrkC磷酸化Westernblot检测发现NSC/DC组p-TrkC水平(1．100±0.162)高于其余两组［NSC组、NSC/DC+NT-3抗体组分别为(0．651±0．052)、(0．392±0．066)，P＜0.05］，且变化趋势同TrkC相似(图3)。p鄄TrkC→GAPDH→←220×103←36×1031231:NSC/DC组;2:NSC组;3:NSC/DC+NT-3抗体组图3Westernblot检测各组NSC的p-TrkC蛋白的表达3讨论神经干细胞具有促进脊髓损伤修复的能力［12］，但是单独移植神经干细胞的存活和分化非常有限，主要原因在于局部的抑制性微环境不利于其存活和分化，故而目前多采用干细胞联合神经营养策略，如增加局部NT-3、BDNF［4］，或者联合移植具有神经营养作用的细胞［5］以改善局部微环境。本实验证实DC和NSC共培养能够增加DC中NT-3表达，并转而上调NSC中NT-3特异性受体TrkC表达，促进NSC存活;在共培养体系中使用NT-3特异性中和抗体能够选择性阻断该效应，并下调p-TrkC水平，表明该作用是通过NT-3/TrkC途径而实现。现已证实，树突状细胞在受到外界抗原刺激时能增加包括NT-3、BDNF在内的多种神经?
(1．148±0．038)、(0．912±0．068)、(0．682±0．087)，图2］。TrkC→GAPDH→←94×103←36×1031231:NSC/DC组;2:NSC组;3:NSC/DC+NT-3抗体组图2Westernblot检测各组NSC的TrkC蛋白的表达2．4与DC共培养促进NSC中TrkC磷酸化Westernblot检测发现NSC/DC组p-TrkC水平(1．100±0.162)高于其余两组［NSC组、NSC/DC+NT-3抗体组分别为(0．651±0．052)、(0．392±0．066)，P＜0.05］，且变化趋势同TrkC相似(图3)。p鄄TrkC→GAPDH→←220×103←36×1031231:NSC/DC组;2:NSC组;3:NSC/DC+NT-3抗体组图3Westernblot检测各组NSC的p-TrkC蛋白的表达3讨论神经干细胞具有促进脊髓损伤修复的能力［12］，但是单独移植神经干细胞的存活和分化非常有限，主要原因在于局部的抑制性微环境不利于其存活和分化，故而目前多采用干细胞联合神经营养策略，如增加局部NT-3、BDNF［4］，或者联合移植具有神经营养作用的细胞［5］以改善局部微环境。本实验证实DC和NSC共培养能够增加DC中NT-3表达，并转而上调NSC中NT-3特异性受体TrkC表达，促进NSC存活;在共培养体系中使用NT-3特异性中和抗体能够选择性阻断该效应，并下调p-TrkC水平，表明该作用是通过NT-3/TrkC途径而实现。现已证实，树突状细胞在受到外界抗原刺激时能增加包括NT-3、BDNF在内的多种神经营养因子的表达［9，13］，表明该体系中，神经干细胞或相关因素可能作为抗原性物质刺激树突状细胞而促进其1190第35卷第12期2013年6月30日第三军医大学学报JThirdMilMedUnivVol．35，No．12Jun．302013
【参考文献】：
期刊论文
[1]体外树突状细胞通过NT-3上调P-ERK1/2的表达促进神经干/祖细胞分化[J]. 陈太邦,赵建华,王永飞,王钟,郭乔楠. 第三军医大学学报. 2012(23)
[2]DCs和NSPCs共培养促进NSPCs增殖及其机制的初步研究[J]. 王永飞,赵建华,晁瑞,陈太邦,郭乔楠. 第三军医大学学报. 2012(05)
[3]树突细胞及神经干细胞/前体细胞联合移植促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复[J]. 晁瑞,赵建华,刘明永,王永飞,郭乔楠. 第三军医大学学报. 2011(10)
本文编号：3419556
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