Sigma E基因对耻垢分枝杆菌药物敏感性影响及其机制初步探索

发布时间：2021-10-05 08:23

　　目的:构建SigE过表达耻垢分枝杆菌,通过应激功能试验,证实SigE表达成功有活性。观察SigE过表达耻垢分枝杆菌对多种药物生存率的变化,及敲除SigE或表达“抗SigE”对药物生存率的变化,反映SigE对药物敏感性影响。利用Rpf E促进持留菌复苏,检测复苏指数,了解SigE促进细菌持留影响药物敏感性的可能机制。经高通量测序分析差异基因,进一步了解SigE可能与细菌的哪些基因有关,为后续改善分枝杆菌耐药性的研究奠定基础。方法:1.PCR扩增出耻垢分枝杆菌sigE基因,克隆入质粒p MV261的多克隆位点,构建重组p MV261-SigE质粒,测序验证。重组质粒电转入耻垢分枝杆菌,Western blot检测SigE的表达。2.通过十二烷基硫酸钠、酸和过氧化氢应激试验反映SigE对应激的影响。DDP和MMC作用后观察SigE对DNA损伤应激的影响。3.设立含空质粒转化菌为对照组,采用刃天青作为指示剂的微量滴定板法和菌落计数法检测细菌的生存率反映细菌对抗结核药物的敏感性。4.构建sigE基因缺失突变体,验证缺失sigE基因对耻垢分枝杆菌药物敏感性影响,同时构建p MV261-MSMEG-... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

1sigE的PCR增产物

2pMV261-SigE双酶切鉴定

图 1.1.3. pMV261-SigE 质粒测序结果Fig.1.1.3 Results of DNA sequencing of pMV261-SigE图 1.1.4. Western-blot 检测 SigE 表达Fig1.1.4 SigE expression detection by Western-blot3,4;5,6are supernatant and precipitation of pMV261-SigE/MS lysate induced at 42 °fo7,8 are supernatant and precipitation of pMV261/MS lysate at 42 °C for 3 h.E 对 SDS 压力应激生存率增强入 SDS 的培养基来模拟巨噬细胞内的表面压力环境[3]，pMV261

【参考文献】：
期刊论文
[1]福建省耐多药结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物表型耐药与gyrA基因突变特征分析[J]. 魏淑贞,赵永,梁庆福,林建,林淑芳.  中国人兽共患病学报. 2016(10)
[2]分枝杆菌表达质粒的快速构建及ClpC2基因功能初步研究[J]. 康月茜,卢楠,孙菱,李岱容,杨春.  免疫学杂志. 2016(02)
[3]革兰阴性杆菌中应激反应机制对细菌耐药调控的研究进展[J]. 周丽芳,赵虎.  国际检验医学杂志. 2014(20)
[4]结核分枝杆菌sigma因子的功能和调节机制[J]. 许瑞,杜先智.  国际呼吸杂志. 2010 (20)

硕士论文
[1]结核分枝杆菌Cas2（Rv2816c）在胁迫应答及胞内存活中的作用与分子机理[D]. 黄琴琴.西南大学 2015



本文编号：3419355