柯萨奇病毒A组6型TaqMan一步法实时荧光定量PCR方法的建立

发布时间：2021-10-07 21:15

　　目的建立一种灵敏、特异的一步法实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）,用于快速、准确地检测柯萨奇病毒A组6型（CV-A6）。方法利用MEGA7.0软件比对GenBank数据库中15条CV-A6VP1序列,选择高保守区域设计特异性引物和探针;以体外转录获得的RNA为标准品,绘制标准曲线,建立检测CVA6病毒的RT-qPCR方法;对该方法的灵敏度、特异度、重复性进行评估;并利用该方法对CV-A6病毒感染后的乳鼠组织进行病毒载量的检测。结果该方法在10²～10¹¹ copy/μL模板范围内出现良好的扩增曲线,检测极限约为102 copy/μL,标准曲线中R²系数为0.999,扩增效率为109.6%;且该方法对肠道病毒71型（EVA71）、柯萨奇病毒A组16型（CV-A16）和柯萨奇病毒A组10型（CV-A10）均无交叉反应;另外,该方法在组间重复试验中,变异系数（CV）值小于2.0%。结论本实验建立的方法具有较强的灵敏度、特异度和重复性,可用于CV-A6病毒的日常检测、实验室诊断和定量分析。 

【文章来源】：国际检验医学杂志. 2020,41(11)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

不同稀释度的扩增曲线

利用该方法检测EV-A71、CV-A16、CV-A6和CV-A10病毒核酸时，仅有CV-A6出现阳性扩增曲线，其余病毒及NTC检测结果均为阴性，见图2。2.5 乳鼠组织病毒载量检测结果

用该方法检测YN-A13毒株感染1日龄BALB/c乳鼠后各组织中CV-A6的载量。其中，各样本均出现良好的扩增曲线见图3A。Ct值在18.98～34.46，根据各样本达到荧光阈值对应的Ct值和标准曲线的公式可精确计算出各组织中CV-A6病毒的载量，见图3B。3 讨论

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3422783