质粒转染比例对人乳头瘤病毒16/18型假病毒制备的影响

发布时间：2021-10-09 13:37

　　高危型人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）的持续感染与宫颈癌、阴道癌、口腔癌等恶性疾病的发生相关,目前主要通过基于L1蛋白的HPV疫苗进行预防。而假病毒（Pseudovirus,PsV）的高效稳定生产是相关预防性疫苗免疫保护性评价的重要环节。为初步探究PsV生产过程中各质粒的配比关系对不同型别PsV制备的影响。本实验采用人乳头瘤病毒的16型（HPV16）和18型（HPV18）两种型别的相应质粒转染细胞,编码L1蛋白的质粒转染质量固定为10μg,分别改变编码L2蛋白质粒与EGFP报告质粒的转染比例,通过计算PsV的TCID₅₀值、测定L1蛋白含量以及PsV的感染率对不同质粒转染配比下的假病毒进行评估。结果显示在HPV16PsV模型中,L1与L2转染质量比为10μg∶2μg时,可以得到TCID₅₀较高的PsV,而当HPV18 PsV达到最大TCID₅₀时,L1与L2的配比为10μg∶1μg,其TCID₅₀略大于10μg∶2μg组;L1与L2比例为10μg∶2μg时两种PsV皆... 

【文章来源】：病毒学报. 2020,36(05)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

Qiagen试剂盒提取的质粒核酸电泳图

TCID50测定结果显示，在HPV16、HPV18 Ps V模型中，改变报告基因EGFP质粒转染质量配比使得所产Ps V的TCID50及L1蛋白表达水平产生差异，但L1表达水平仅在HPV16 Ps V模型中表现出较强规律性（图4):EGFP质粒转染质量配比增大使得HPV16 Ps V的TCID50降低，但梯度配比6μg、8μg、10μg之间TCID50差异不显著（paired T test,p分别为：0.1835、0.4226、0.4226），表明在EGFP取6μg～10μg时，所产假病毒均有较高TCID50值。另外，其L1蛋白表达水平随EGFP质粒转染配比上升呈显著下降趋势，表明所制备Ps V液体中Ps V颗粒减少，不利于HPV结构生物学研究样品制备。HPV18 Ps V的TCID50随EGFP质粒转染配比上升先增后减，在配比为8μg时达到最大57252 TU/μL，其L1蛋白表达水平变化规律不明显。图3 不同L2质粒转染配比下Ps V的感染率

不同L2质粒转染配比下Ps V的感染率

【参考文献】：
期刊论文
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[2]悬浮驯化HEK-293FT细胞表达人乳头瘤病毒16型假病毒及其冷冻电镜结构解析[J]. 王大宁,刘亚静,郑清炳,李智海,范飞,柳欣林,宋硕,顾颖,夏宁邵,李少伟.  病毒学报. 2016(05)
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本文编号：3426490