通过两步离子交换层析建立保留HLA-A2二聚体构象的纯化方法

发布时间：2021-10-15 14:13

　　目的建立两步离子交换层析纯化方法以获得浓缩的高纯度HLA-A2二聚体。方法收集转染有HLA-A2-IgG1 Fc重组基因的7A2D细胞上清,并进行ELISA和Western blot鉴定7A2D细胞表达的HLA-A2二聚体,检测其浓度;应用SPA亲和层析和两步法离子交换层析技术分别纯化HLA-A2二聚体,并比较2种方法纯化HLA-A2二聚体的效率。结果 7A2D细胞可表达正确构象的HLA-A2二聚体,Western blot检测显示融合蛋白的分子量与预期大小一致,7A2D细胞上清中HLA-A2二聚体的浓度为4.4μg/mL。SPA亲和层析法中pH3.0的洗脱条件使大部分的HLA-A2二聚体发生了变性反应,纯化后构象正确的HLA-A2二聚体纯度为（10.4±1.3）%,回收率仅为（7.3±1.1）%;两步离子交换层析后HLA-A2二聚体纯度为（72.9±4.6）%、回收率为（51.9±6.5）%,均显著高于SPA亲和层析法。结论建立了一种纯化条件相对温和的两步法离子交换层析纯化方法,经过该方法制备获得的高纯度与较高浓度的HLA-A2二聚体可保持正确的空间构象,达到纯化与浓缩的目的。 

【文章来源】：华中科技大学学报(医学版). 2020,49(03)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要实验材料
        1.1.1 实验细胞
        1.1.2 实验抗体
        1.1.3 主要试剂
    1.2 实验方法
        1.2.1 7A2D细胞表达的HLA-A2二聚体的收集
        1.2.2 HLA-A2二聚体的ELISA鉴定
        1.2.3 HLA-A2二聚体的Western blot鉴定
        1.2.4 HLA-A2二聚体的浓度测定
        1.2.5 SPA亲和层析法纯化HLA-A2二聚体
        1.2.6 两步法离子交换层析技术纯化HLA-A2二聚体
        1.2.7 两种纯化方法的效率比较
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 7A2D细胞可高效表达HLA-A2二聚体
    2.2 SPA亲和层析纯化方法容易导致HLA-A2二聚体变性
    2.3 两步法离子交换层析技术可有效纯化HLA-A2二聚体
    2.4 两种纯化方法的效率比较
3 讨论



本文编号：3438114