基因定点突变和适配体小肽对拟穴青蟹主要过敏原的影响
发布时间：2021-10-19 22:43
蟹类等甲壳类水产品作为联合国粮农组织公布的八大类过敏食物之一,由其引起的食物过敏反应通常伴随终身,对过敏患者的生活造成严重影响。本文针对拟穴青蟹中（Scylla paramamosain）主要过敏原原肌球蛋白（tropomyosin,TM）和精氨酸激酶（arginine kinase,AK）的抗原表位进行深入研究,通过基因定点突变和适配体小肽技术降低TM和AK的致敏性,得到的低致敏性蛋白可望用于水产品过敏患者的免疫治疗。本研究对TM和AK构象表位中关键氨基酸和半胱氨酸进行基因定点突变,构建重组表达载体pET-28a-mTM/mAK,在E.coli BL21（DE3）菌株中诱导表达得到TM的2种可溶性多突变体蛋白,分别命名为mTM1(TM/R90A-E164A-Y267A)和mTM2(TM/N132A-M171A-Y267A);AK的3种包涵体突变蛋白,分别命名为mAK1(AK/C201A)、mAK2(AK/K33A-T174A)和mAK3(AK/T174A-C201A)。采用兔...
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号表
第1章 引言
1.1 食物过敏概况
1.2 食物过敏原及其抗原表位
1.3 甲壳类水产品主要过敏原
1.4 食物过敏的免疫治疗
1.5 基因定点突变
1.6 适配体小肽
1.7 本研究的目的和意义
第2章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 菌株和载体
2.1.2 动物
2.1.3 血清
2.1.4 主要仪器设备
2.1.5 主要试剂
2.1.6 培养基及溶液配制
2.2 方法
2.2.1 TM和AK的基因定点突变与重组表达
2.2.2 突变型过敏原的结构及免疫结合活性分析
2.2.3 突变型过敏原的树突状细胞吞噬模型分析
2.2.4 突变型过敏原的BALB/c小鼠敏化模型分析
2.2.5 TM和AK线性表位适配体小肽的筛选与鉴定
2.2.6 统计分析
第3章 结果与分析
3.1 TM和AK的基因定点突变与重组表达
3.1.1 TM和AK的基因定点突变
3.1.2 mTM和mAK的表达及鉴定
3.2 突变型TM和AK的结构及免疫结合活性分析
3.2.1 二级结构分析
3.2.2 表面疏水性分析
3.2.3 免疫结合活性分析
3.4 树突状细胞吞噬模型分析mTM和 mAK
3.5 BALB/c小鼠敏化模型分析mTM和 mAK
3.5.1 小鼠血清中特异性抗体水平检测
3.5.2 小鼠脾脏淋巴细胞中细胞因子水平检测
3.5.3 mTM和mAK对小鼠脾脏淋巴细胞分群的影响
3.6 TM和AK线性表位适配体小肽的筛选与鉴定
3.6.1 蛋白酶酶切位点预测
3.6.2 反义小肽的设计
3.6.3 TM和AK与反义小肽的分子对接
3.6.4 适配体小肽对TM和AK免疫结合活性抑制作用的分析
第4章 讨论
4.1 突变型TM和AK的重组表达与性质分析
4.2 突变型TM和AK体内外实验分析
4.3 TM和AK的线性表位适配体小肽分析
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
附录
在学期间科研成果情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]核酸适配体在Hg2+检测中的应用[J]. 黄亚飞,闫娇,陈爱亮,章程辉,朱超. 中国食品学报. 2019(01)
[2]特异性免疫治疗在过敏性疾病中的作用研究进展[J]. 袁锡华. 临床医药文献电子杂志. 2019(02)
[3]基于分子对接方法的青藤碱对TLR4受体的分子作用机制研究[J]. 李秋霞,高永翔. 成都中医药大学学报. 2018(04)
[4]舌下特异性免疫治疗儿童过敏性哮喘的临床效果观察[J]. 覃美. 临床医药文献电子杂志. 2019(01)
[5]多光谱法和分子对接研究α-熊果苷与人血清白蛋白的相互作用[J]. 熊时鹏,陈建波. 光谱学与光谱分析. 2018(11)
[6]记忆B细胞能否分泌抗体[J]. 黎文妍,王任翔,陈国娟,黄爱琼. 生物学教学. 2018(11)
[7]早期胃癌血清特异标志物过氧化物酶4核酸适配体的筛选、鉴定与应用[J]. 杜振亚,贾茹涵,李文慧,杨静,习静,石大林,韩跃武. 中国生物化学与分子生物学报. 2018(10)
[8]舌下变应原特异性免疫治疗儿童过敏性哮喘的效果观察[J]. 华彤. 中国当代医药. 2018(29)
[9]舌下特异性免疫疗法在尘螨所致的过敏性鼻结膜炎治疗中的应用[J]. 肖华,郭丽君. 山东医药. 2018(26)
[10]特异性免疫不同方式给药治疗变应性鼻炎的临床效果观察[J]. 赵广辉,刘杰,宗国昶,冯小宝,鲁珺,王苑. 现代生物医学进展. 2018(12)
硕士论文
[1]拟穴青蟹过敏原精氨酸激酶的抗原表位分析研究[D]. 杨阳.集美大学 2015
[2]β-乳球蛋白致敏表位的适配体定位、酶解及脱敏研究[D]. 徐洪军.安徽农业大学 2014
[3]拟穴青蟹精氨酸激酶的过敏性及其构效关系的初步研究[D]. 毛海燕.集美大学 2013
本文编号：3445739
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号表
第1章 引言
1.1 食物过敏概况
1.2 食物过敏原及其抗原表位
1.3 甲壳类水产品主要过敏原
1.4 食物过敏的免疫治疗
1.5 基因定点突变
1.6 适配体小肽
1.7 本研究的目的和意义
第2章 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 菌株和载体
2.1.2 动物
2.1.3 血清
2.1.4 主要仪器设备
2.1.5 主要试剂
2.1.6 培养基及溶液配制
2.2 方法
2.2.1 TM和AK的基因定点突变与重组表达
2.2.2 突变型过敏原的结构及免疫结合活性分析
2.2.3 突变型过敏原的树突状细胞吞噬模型分析
2.2.4 突变型过敏原的BALB/c小鼠敏化模型分析
2.2.5 TM和AK线性表位适配体小肽的筛选与鉴定
2.2.6 统计分析
第3章 结果与分析
3.1 TM和AK的基因定点突变与重组表达
3.1.1 TM和AK的基因定点突变
3.1.2 mTM和mAK的表达及鉴定
3.2 突变型TM和AK的结构及免疫结合活性分析
3.2.1 二级结构分析
3.2.2 表面疏水性分析
3.2.3 免疫结合活性分析
3.4 树突状细胞吞噬模型分析mTM和 mAK
3.5 BALB/c小鼠敏化模型分析mTM和 mAK
3.5.1 小鼠血清中特异性抗体水平检测
3.5.2 小鼠脾脏淋巴细胞中细胞因子水平检测
3.5.3 mTM和mAK对小鼠脾脏淋巴细胞分群的影响
3.6 TM和AK线性表位适配体小肽的筛选与鉴定
3.6.1 蛋白酶酶切位点预测
3.6.2 反义小肽的设计
3.6.3 TM和AK与反义小肽的分子对接
3.6.4 适配体小肽对TM和AK免疫结合活性抑制作用的分析
第4章 讨论
4.1 突变型TM和AK的重组表达与性质分析
4.2 突变型TM和AK体内外实验分析
4.3 TM和AK的线性表位适配体小肽分析
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
附录
在学期间科研成果情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]核酸适配体在Hg2+检测中的应用[J]. 黄亚飞,闫娇,陈爱亮,章程辉,朱超. 中国食品学报. 2019(01)
[2]特异性免疫治疗在过敏性疾病中的作用研究进展[J]. 袁锡华. 临床医药文献电子杂志. 2019(02)
[3]基于分子对接方法的青藤碱对TLR4受体的分子作用机制研究[J]. 李秋霞,高永翔. 成都中医药大学学报. 2018(04)
[4]舌下特异性免疫治疗儿童过敏性哮喘的临床效果观察[J]. 覃美. 临床医药文献电子杂志. 2019(01)
[5]多光谱法和分子对接研究α-熊果苷与人血清白蛋白的相互作用[J]. 熊时鹏,陈建波. 光谱学与光谱分析. 2018(11)
[6]记忆B细胞能否分泌抗体[J]. 黎文妍,王任翔,陈国娟,黄爱琼. 生物学教学. 2018(11)
[7]早期胃癌血清特异标志物过氧化物酶4核酸适配体的筛选、鉴定与应用[J]. 杜振亚,贾茹涵,李文慧,杨静,习静,石大林,韩跃武. 中国生物化学与分子生物学报. 2018(10)
[8]舌下变应原特异性免疫治疗儿童过敏性哮喘的效果观察[J]. 华彤. 中国当代医药. 2018(29)
[9]舌下特异性免疫疗法在尘螨所致的过敏性鼻结膜炎治疗中的应用[J]. 肖华,郭丽君. 山东医药. 2018(26)
[10]特异性免疫不同方式给药治疗变应性鼻炎的临床效果观察[J]. 赵广辉,刘杰,宗国昶,冯小宝,鲁珺,王苑. 现代生物医学进展. 2018(12)
硕士论文
[1]拟穴青蟹过敏原精氨酸激酶的抗原表位分析研究[D]. 杨阳.集美大学 2015
[2]β-乳球蛋白致敏表位的适配体定位、酶解及脱敏研究[D]. 徐洪军.安徽农业大学 2014
[3]拟穴青蟹精氨酸激酶的过敏性及其构效关系的初步研究[D]. 毛海燕.集美大学 2013
本文编号：3445739
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/3445739.html
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