人降钙素原单克隆抗体的制备及其荧光免疫层析法的初步研究

发布时间：2021-10-30 06:22

　　降钙素原（procalcitonin,PCT）是目前公认的炎性标志物,在感染性疾病的鉴别诊断、疗效监测和预后判断等方面有重要价值。免疫荧光和电化学技术的联合应用实现了对PCT的定量、快速检测。目前PCT的检测试剂盒均基于抗原抗体的特异性结合反应,其抗原和抗体均来源于进口厂商。制备稳定的抗原和高特异性的单克隆抗体是实现国产化产品的基础。目的:原核表达人降钙素原重组蛋白,优化蛋白表达条件;制备高纯度的PCT单克隆抗体并对其进行鉴定;建立PCT荧光免疫层析方法,对临床标本进行检测以评估性能。方法:将构建的重组表达菌株E.coli BL21（含PCT-pET22b（+））活化,诱导表达PCT蛋白,优化IPTG诱导蛋白表达的浓度。用Ni-NTA亲和层析法对目的蛋白进行纯化,蛋白印迹法和胶体金法对其进行鉴定。获得的PCT重组蛋白与佐剂充分研磨乳化,采用长程免疫法皮下多点注射Balb/c小鼠,4次免疫后检测小鼠血清抗体效价。达到融合条件后,取脾细胞和骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并进行亚克隆3⁴次。将单克隆细胞株注入小鼠腹腔刺激产生腹水,... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

降钙素原氨基酸序列图

扑卦?タ寺】固宓闹票讣捌溆?饷庖卟阄龇ǖ某醪窖芯?20图2.1 重组菌株诱导表达产物分析M：蛋白质标准；1：裂菌后沉淀；2：裂菌后上清；Fig 2.1 Analysis of expression products of recombinant strainsM：Protein marker；1：Precipitation after splitting；2：Supernatant after splitting2.3.2 IPTG 诱导 PCT 蛋白表达的优化设置不同 IPTG 诱导浓度观察目的蛋白的表达量，分别将样本进行SDS-PAGE 电泳，结果显示：在 IPTG 终浓度为 0.8mmol/L 时蛋白的表达量达到最高（图 2.2）。图2.2 诱导剂IPTG浓度优化M：蛋白质标准；1~5：诱导剂 IPTG 终浓度 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1

SDS-PAGE 电泳，结果显示：在 IPTG 终浓度为 0.8mmol/L 时蛋白的表达量达到最高（图 2.2）。图2.2 诱导剂IPTG浓度优化M：蛋白质标准；1~5：诱导剂 IPTG 终浓度 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mmol/LFig 2.2 Optimization of IPTG concentrationM：Protein marker；1~5 ：Final concentration of IPTG 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mmol/L

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3466225