穿透支原体Ferritin的表达、纯化及其抗氧化活性研究

发布时间：2021-11-13 10:38

　　背景:穿透支原体（M.penetrans,Mpe）是一种与艾滋病相关的支原体,因其能黏附并穿透真核细胞膜而得名。现在发现Mpe除了与艾滋病相关外,还与肿瘤的发生和发展也具有密切关系。人的免疫系统会产生大量的活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）来抵御病原菌的入侵。故Mpe在黏附感染并进入到宿主的过程中不可避免会遇到大量的ROS,抗氧化能力的强弱对于Mpe在宿主体内的存活及致病都极为重要。但迄今为止,Mpe的抗氧化机制仍不清楚。目的:本文构建能够表达穿透支原体Ferritin蛋白的原核表达质粒p ET15b-Ferritin,诱导表达Ferritin蛋白并利用亲和层析纯化,检测Ferritin蛋白的抗氧化活性,并测定它的免疫原性,为研究Ferritin蛋白在Mpe致病过程中的功能提供实验基础。方法:1.利用生物信息学方法分析Mpe的Ferritin蛋白的二级结构和三级结构等生物学特性。2.合成能够在大肠杆菌中表达全长Ferritin蛋白的编码基因,根据Ferritin基因序列设计特异性PCR引物,PCR扩增Ferritin基因。使用Nde I和Bam H ... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

采用SignalP-4.1软件预测Ferritin信号肽Figure1ThesignalpeptideofFerritinwaspredictedbyusingSignalP-4.1software

件预测 Ferritin 蛋白定位在支原体细胞质内，与通过 SignalP4.1 预测它无信的结果相符合（图 1）。图 1 采用 SignalP-4.1 软件预测 Ferritin 信号肽Figure 1 The signal peptide of Ferritin was predicted by using SignalP-4.1 software利用 Clustal Omega 分析穿透支原体，解脲脲原体和衣阿华支原体 Ferritin的同源性，结果如图 2 所示，发现这些蛋白之间的同源性并不是特别高，但活性位点特别保守（划线部分为 Ferritin 蛋白的活性位点）。

图 3 Ferritin 蛋白的二级结构Figure 3 The secondary structure of Ferritin利用 SWISS－MODEL 软件模拟 Ferritin 三级结构，得到的是一个同源 24聚体，由 24 个相同的 Ferritin 蛋白单体组成，其中间是一个用来存储铁元素的空腔（图 4）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]生殖支原体感染与女性黏液脓性宫颈炎相关性研究[J]. 李冰蕾,占城.  实用皮肤病学杂志. 2017(02)
[2]支原体脂质相关膜蛋白致病机制的研究进展[J]. 王素果,曾焱华.  微生物学免疫学进展. 2016(04)
[3]生殖道支原体感染诊治专家共识[J]. 张岱,刘朝晖.  中国性科学. 2016(03)
[4]早期难免流产患者沙眼衣原体和解脲支原体与T淋巴细胞亚群水平的相关性[J]. 朱晓敏,何汝娇,黄志宏,罗达辉,陈建国.  广东医学. 2015(11)
[5]生殖支原体脂质相关膜蛋白诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2[J]. 谢婧,游晓星,曾焱华,李冉辉,陈列松,朱翠明,何军,余敏君,吴移谋.  细胞与分子免疫学杂志. 2014(12)
[6]生殖道支原体感染状况及药敏分析[J]. 彭敬红,刘军,张国英,庄卫忠,侯彦强.  国际检验医学杂志. 2014(13)
[7]人型支原体合并解脲脲原体感染的检出率和耐药性分析[J]. 周运恒,马红霞,石晓星,刘风华,曹广亚.  中国感染与化疗杂志. 2014(01)
[8]肺炎支原体感染研究新进展[J]. 陈开革,黎石宝.  中国病原生物学杂志. 2013(05)
[9]生殖支原体TaqMan荧光PCR检测方法的建立[J]. 李晶,顾一心,何利华,孟凡亮,赵飞.  中国病原生物学杂志. 2012(11)
[10]生殖支原体感染和HIV感染相关性的Meta分析[J]. 朱一,吴建茹,张钰,王蓓.  中国循证医学杂志. 2012(11)



本文编号：3492868