VIP对jurkat淋巴细胞株CD4表达的影响及其可能机制

发布时间：2017-05-09 12:15

  本文关键词：VIP对jurkat淋巴细胞株CD4表达的影响及其可能机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景:血管活性肠肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)是一种常见的神经肽,已有大量研究证实肿瘤细胞可分泌VIP,并且对多种免疫细胞均有调节作用,可促进CD4~+T淋巴细胞向Th2分化,但其对于T淋巴细胞CD4/CD8表型的影响尚未见报道。Thpok是T淋巴细胞分化中重要而必需的转录因子,在阳性选择过程中促进双阳性T淋巴细胞向CD4~+T淋巴细胞分化,并且维持成熟T淋巴细胞CD4的表型及抑制CD8分子的表达。Thpok与转录因子Runx3的相互拮抗作用环是调节T淋巴细胞CD4/CD8分化的关键,而GATA3则在此过程中与Thpok表现出协同作用。T淋巴细胞的分化过程目前已逐渐明了,但关于已分化成熟的T淋巴细胞表型的改变的研究却很少。我们前期的研究发现胃癌组织中CD4表达较癌旁组织明显升高,转录因子Thpok也呈现相应的变化,因此,我们推测肿瘤细胞可能通过分泌VIP促使已分化成熟的T淋巴细胞表型发生改变,并且该变化与Thpok等转录因子相关。为此,我们设计体外实验探究VIP对jurkat淋巴细胞株CD4表达的影响及其可能机制。目的:体外实验探究VIP对jurkat淋巴细胞株CD4表达的影响及其可能的机制。方法:分别检测不同淋巴细胞株jurkat与molt-4之间CD4/CD8的表达及转录因子Thpok、Runx3及GATA3之间的差异;用VIP分别作用于静息状态下的jurkat细胞及经PMA+离子霉素活化的jurkat细胞后,用流式细胞术检测经药物作用后的各组细胞CD4及CD8表达的变化情况,用荧光定量PCR及免疫印迹法分别检测Thpok、GATA3、Runx3的mRNA及蛋白变化。分析不同淋巴细胞株之间CD4/CD8表型不同的原因,探究各实验组间jurkat细胞CD4表达差异的可能的机制。结果:1.jurkat细胞表面有VPAC1和VPAC2表达;2.jurkat细胞高表达CD4,molt-4细胞高表达CD8(p0.05);jurkat细胞的Thpok及Runx3的表达水平均明显高于molt-4细胞(p0.05),但二者间Thpok的差异更为显著;3.当10~(-6)M VIP作用于jurkat细胞时,Thpok的表达明显上调(P0.05),VIP作用于jurkat细胞的实验浓度为10~(-6)M;4.jurkat细胞活化后CD4、CD8的表达均上调,联合VIP作用后CD4表达进一步增加(p0.05);5.a.jurkat细胞活化后Thpok mRNA表达上调,联合VIP作用后进一步增加(p0.05);b.jurkat细胞活化后Runx3 mRNA及蛋白表达均明显上调(P0.05);c.VIP刺激静息状态下的jurkat细胞GATA3蛋白表达呈上调趋势。结论:1.已分化成熟的jurkat细胞仍具有可塑性,活化后CD4、CD8的表达均可上调;2.VIP可诱导活化状态下jurkat细胞CD4表达增加,且该变化可能与Thpok有关。
【关键词】：VIP T淋巴细胞 细胞分化 Thpok Runx3 GATA3
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文缩略表10-11
• 第1章 引言11-15
• 第2章 材料与方法15-29
• 2.1 细胞来源15
• 2.2 主要试剂15-16
• 2.3 主要液体配制16-17
• 2.4 主要仪器设备17-18
• 2.5 实验技术路线图及分组18-19
• 2.5.1 实验技术路线图18
• 2.5.2 实验分组18-19
• 2.6 实验方法19-21
• 2.6.1 细胞培养（jurkat淋巴细胞株、mol-4淋巴细胞株）19
• 2.6.2 检测jurkat细胞VIP受体表达情况19-20
• 2.6.3 检测jurkat细胞株与molt-4细胞株CD4/CD8及转录因子的表达情况20
• 2.6.4 确定VIP作用于jurkat细胞的最佳浓度20
• 2.6.5 药物干预实验20-21
• 2.7 具体实验步骤21-28
• 2.7.1 免疫细胞化学21-22
• 2.7.2 荧光定量PCR22-25
• 2.7.3 Westorn-blot（免疫印迹法）25-27
• 2.7.4 流式细胞术27-28
• 2.8 统计分析28-29
• 第3章 结果29-34
• 3.1 jurkat细胞VIP受体的表达情况29
• 3.2.jurkat细胞株及molt-4细胞株CD4/CD8与各转录因子的表达情况29-30
• 3.3 VIP最佳作用浓度及活化条件确定30-31
• 3.4 不同实验组CD4/CD8表型变化31-33
• 3.5 不同实验组间Thpok、GATA3、Runx3的表达变化33-34
• 第4章 讨论34-38
• 第5章 结论38-39
• 致谢39-40
• 参考文献40-44
• 攻读学位期间的研究成果44-45
• 综述45-51
• References49-51

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