外周血造血干细胞微泡的提取鉴定及初探其生物学特性

发布时间：2017-05-09 12:04

  本文关键词：外周血造血干细胞微泡的提取鉴定及初探其生物学特性，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的：外周血造血干细胞是存在于外周血中的一类具有高度自我更新和分化潜能的造血细胞群体。正常生理条件下外周血中造血干细胞的含量约占骨髓中的0.1%-1%,当给予动员剂刺激后,外周血中的造血干细胞含量增加,CD34+细胞占外周血单个核细胞(MNC)的0.5%-1.5%。随着外周血造血干细胞采集简便、短期内采集,另外输注给受者后造血功能和免疫功能重建快及植入率高,逐渐取代骨髓造血干细胞用于临床。外周血造血干细胞具有促进造血、免疫功能重建、抗肿瘤等作用。研究已证实胚胎干细胞、脐带血造血干细胞、间充质干细胞等干细胞可分泌微泡,而且分泌的微泡携带母细胞的成分及特性,另外分泌的微泡没有了母体细胞的一些缺点。对于外周血造血干细胞能否分泌微泡,目前国内外尚无报道。本研究旨在探讨外周血造血干细胞能否分泌微泡,如果外周血造血干细胞能分泌微泡,初步探讨外周血造血干细胞微泡的生物学特性。研究内容：1.验证外周血造血干细胞能否分泌微泡；2.如果能,开始验证它们的生物学功能。研究方法：1.使用超速离心法提取孵育后外周血造血干细胞培养上清中的“物质”,并应用负染透射电镜从形态上鉴别提取的物质是否为微泡；2.如果验证外周血造血干细胞能分泌微泡,应用细胞膜染液PKH-26标染微泡和细胞核染液Hoechst 33258标染PBMNC细胞核,再通过激光扫描共聚焦显微镜观察微泡能否进入PBMNC中；3.如果能进入,验证微泡能否改变受体细胞PBMNC的杀伤效应。研究结果：1.外周血造血干细胞采能分泌微泡；2.外周血造血干细胞微泡能进入PBMNC细胞中；3.初步验证了微泡能改变受体细胞PBMNC的杀伤效应。研究结论：1.首次证实了外周血造血干细胞可以分泌微泡；2.初步验证了外周血造血干细胞微泡可以改变受者细胞的生物学功能。
【关键词】：外周血造血干细胞 微泡
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 前言9-10
• 第一章 微泡的提取与鉴定10-23
• 第一节 K562细胞培养上清微泡的提取和鉴定10-13
• 1. 实验材料10-11
• 2. 实验方法11-12
• 3. 结果12-13
• 第二节 胎牛血清微泡的提取与鉴定13-15
• 1. 实验材料14
• 2. 实验方法14-15
• 3. 结果15
• 第三节 外周造血干细胞微泡的提取和鉴定15-19
• 1. 实验材料15-16
• 2. 实验方法16-17
• 3. 结果17-19
• 第四节 外周血造血干细胞微泡的蛋白定量19-20
• 1 实验材料19
• 2 实验方法19-20
• 3 结果20
• 第五节 外周血造血干细胞微泡表面抗原的流式鉴定20-23
• 1 实验材料20-21
• 2 实验方法21-22
• 3 结果22-23
• 第二章 初探外周血造血干细胞微泡的生物学功能23-34
• 第一节 人外周血造血干细胞微泡进入正常受者外周血单个核细胞中23-27
• 1 实验材料23-24
• 2 实验方法24-26
• 3 结果26-27
• 第二节 外周血造血干细胞微泡进入缓解期白血病患者外周血单个核细胞中27-30
• 1 实验材料28
• 2 实验方法28-29
• 3 结果29-30
• 第三节 在体外初步探讨外周血造血干细胞微泡的特性30-34
• 1 实验材料31
• 2 实验方法31-33
• 3 结果33-34
• 第三章 动员后小鼠脾造血干细胞微泡进入受鼠脾单个核细胞中34-38
• 1 实验材料35-36
• 2 实验方法36-37
• 3 结果37-38
• 讨论38-40
• 结论40-41
• 参考文献41-44
• 附录 个人简历44-45
• 致谢45-46
• 综述46-53
• 参考文献51-53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 左洪莉;彭恩兰;刘铁强;黄珊;李玉芳;姚晓兰;尚世臣;艾辉胜;;CB6F1小鼠急性粒单核细胞白血病M4(AML-M4)模型的建立及鉴定[J];解放军医学杂志;2011年01期

2 吴惠惠;刘铁强;孙雪冬;黄晓梅;张锐;刘志强;满秋红;黄雅静;孙琪云;左红莉;乔建辉;余长林;胡锴勋;艾辉胜;郭梅;;白血病小鼠H-2全不相合微移植模型的建立及鉴定[J];中国实验血液学杂志;2014年03期

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本文编号：352439