人源性促甲状腺激素受体单链抗体Fc融合蛋白的制备及鉴定

发布时间：2021-12-23 22:07

　　目的:构建含有促甲状腺激素受体抗体（TRAb）单链抗体的重组载体pFastBac^TM1-ScFv-IgG1Fc,通过Bac-to-Bac表达系统实现单链抗体融合蛋白的高效表达,并检测目的蛋白表达和免疫学活性。方法:TRAb抗体的重链可变区（HV）和轻链可变区（LV）的序列以linker（G4S）连接,构建ScFv;Genbank检索人IgG1Fc序列,SnapGene软件分析上述序列和载体pFastBac^TM1,以基因合成方式构建重组质粒pFastBac^TM1-ScFv-IgG1Fc;pFastBac^TM1-ScFv-IgG1Fc转化感受态大肠杆菌DH10Bac生成重组杆粒,pUC/M13正向和反向引物进行PCR分析确认目的基因的序列;重组杆粒采用Cellfectin?Ⅱ试剂转染昆虫细胞Sf9生成P1病毒储液,继续感染Sf9生成高滴度的P2和P3病毒储液;P3病毒储液感染High Five^TM细胞,收集上清通过SPA-Sepharose CL-4B亲和层析纯化获得较纯的单链抗体... 

【文章来源】：中国免疫学杂志. 2020,36(14)北大核心CSCD

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

重组质粒构建图

重组杆粒的PCR验证

2.4 目的蛋白与TSHR结合力结果显示甲状腺滤泡上皮细胞周围呈现出棕黄色,提示目的蛋白与TSHR具有较高结合力(图5)。图4 ECLIA检测抗体活性浓度

【参考文献】：
期刊论文
[1]抗CD20单链抗体融合显性抗原肽的原核表达和其抑瘤活性研究[J]. 孙蕊,朱琰,冯海凉,卞晓翠,顾蓓,王春景,刘玉琴.  中国免疫学杂志. 2015(04)



本文编号：3549279