VP1Cm—一种对沙眼衣原体高效抑制蛋白的构建

发布时间：2021-12-28 18:42

　　目的设计构建针对沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）具有高效抑制作用的重组蛋白,为衣原体治疗抵抗探索新的解决方法。方法通过生物信息学方法设计VP1Cm蛋白的基因序列。应用基因合成的方法构建重组质粒VP1Cm-pET28a（+）并转化至大肠杆菌中。用带Ni⁺的亲和树脂纯化蛋白,梯度透析复性蛋白。CCK8法测定重组蛋白对Hela细胞的毒性作用。将豚鼠嗜衣原体噬菌体PhiCPG1衣壳蛋白VP1、截短蛋白VP1C、蛋白VP1Cm、杆菌肽和磷酸盐缓冲溶液（PBS）分别与E型Ct标准株于室温下预孵育3 h后接种至Hela细胞,同时设置Ct感染对照组。48 h后免疫荧光染色计数包涵体。多组样本均数间比较用单因素ANOVA分析,两样本均数间比较用Bonferroni检验。结果成功表达并纯化出蛋白VP1Cm。在相同浓度时,PhiCPG1衣壳蛋白VP1、截短蛋白VP1C和蛋白VP1Cm对Ct的抑制率分别为76.20%、85.13%和90.01%。结论经设计过的蛋白VP1Cm对Ct的抑制效果优于PhiCPG1衣壳蛋白VP1及其功能结构域截短蛋白VP1C。 

【文章来源】：中国皮肤性病学杂志. 2020,34(09)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

PhiCPG1的 VP1基因序列与从临床标本中筛查出的VP1基因序列的BLAST比对结果

重组质粒VP1Cm-pET28a(+)酶切鉴定结果

重组蛋白表达、纯化与Western blot鉴定结果

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3554543