自噬参与心外膜祖细胞向冠状动脉平滑肌细胞分化的实验研究
发布时间：2021-12-30 14:44
研究冠脉血管的发育,明确冠脉血管平滑肌细胞（coronary smooth muscle cells,CoSMCs）的起源及分化机制,将为先天性心脏病的防治及心肌梗死后冠脉侧枝循环血管的形成等研究领域提供重要信息。目前研究提示,心外膜祖细胞（Epicardial progenitor cells,EPCs）是CoSMCs的主要起源,但EPCs向CoSMCs分化的具体机制尚不完全明确。自噬（autophagy）是由溶酶体介导的蛋白质及其他细胞器的分解过程,与衰老的细胞器及破坏的蛋白质的清除和维持细胞内环境稳定有密切关系。既往研究证实自噬在哺乳动物的心脏发育与重塑组织和细胞分化过程起着重要作用,但尚无证据表明自噬是否能够参与调控EPCs向CoSMCs分化。在本研究中,我们成功体外培育了小鼠原代EPCs,并通过自噬的诱导和抑制实验观察自噬对EPCs向平滑肌细胞分化的影响,同时进一步在体观察自噬对小鼠冠脉平滑肌发育的影响,以期证实自噬参与调控心外膜祖细胞向冠状动脉平滑肌细胞分化。第一部分:原代EPCs的培养与鉴定目的:探讨构建高纯度心外膜祖细胞的方法,为体外培养并揭示心外膜祖细胞的分化机制奠定...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：88 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
原代心外膜细胞培养步骤示意图
图 2 心外膜祖细胞的培养及 72h 内观察Figure2：culture and 72h observation of epicardial progenitor cells2.2 原代心外膜祖细胞的鉴定为进一步鉴定培养的原代细胞性质，我们通过细胞免疫荧光染色方法观察心外膜祖细胞标志基因 Wt1 和 Tbx18 的表达情况。原代培养 3 天，细胞免疫荧光染色显示培养的大多数细胞表达 EPCs 特异性标志物 Wt1 及 Tbx18，同时观察到多数细胞为 Wt1 及 Tbx18 双阳性细胞。个别细胞未能表达 Wt1 或 Tbx18。同时，以原代心肌细胞作为对照，通过 qPCR 发现我们所培养的细胞群高表达 Tbx18 及 Wt1的 mRNA，而几乎不表达心肌细胞标志物 cTnT。结合组织来源、细胞形态及特异性标志物的表达均证实我们所培养出的细胞为胚胎 EPCs。
图 3 心外膜祖细胞的鉴定。EPC 特异性标记物 WT1 和 Tbx18 在培养细胞中呈阳性共表达疫荧光染色)，而白色箭头所示为少数个细胞不表达 EPC 标记物，标尺为 50μm。EPCs 和肌细胞中 Tbx18、Wt1 与 cTnT(心肌细胞标志物)表达的 qRT-PCR 分析(p < 0.01)。数个实的 x±s(Student's t 检验)表示。Figure 3: Identification of epicardial progenitor cells. EPC specific markers Wt1 and Tbpositively co-expressed in the cultured cells (by immunofluorescence staining), yet a singlewhich did not express the EPC markers wasshown by the white arrow. Scale bar was 50 (C): qRT-PCR analyses of Tbx18, Wt1 vs. cTnT (cardiomyocyte marker) expression in Eand cardiomyocytes (p < 0.01). The data were presented as the means ± SD of thexperiments, Student's t-test.3 讨论
本文编号：3558412
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：88 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
原代心外膜细胞培养步骤示意图
图 2 心外膜祖细胞的培养及 72h 内观察Figure2：culture and 72h observation of epicardial progenitor cells2.2 原代心外膜祖细胞的鉴定为进一步鉴定培养的原代细胞性质，我们通过细胞免疫荧光染色方法观察心外膜祖细胞标志基因 Wt1 和 Tbx18 的表达情况。原代培养 3 天，细胞免疫荧光染色显示培养的大多数细胞表达 EPCs 特异性标志物 Wt1 及 Tbx18，同时观察到多数细胞为 Wt1 及 Tbx18 双阳性细胞。个别细胞未能表达 Wt1 或 Tbx18。同时，以原代心肌细胞作为对照，通过 qPCR 发现我们所培养的细胞群高表达 Tbx18 及 Wt1的 mRNA，而几乎不表达心肌细胞标志物 cTnT。结合组织来源、细胞形态及特异性标志物的表达均证实我们所培养出的细胞为胚胎 EPCs。
图 3 心外膜祖细胞的鉴定。EPC 特异性标记物 WT1 和 Tbx18 在培养细胞中呈阳性共表达疫荧光染色)，而白色箭头所示为少数个细胞不表达 EPC 标记物，标尺为 50μm。EPCs 和肌细胞中 Tbx18、Wt1 与 cTnT(心肌细胞标志物)表达的 qRT-PCR 分析(p < 0.01)。数个实的 x±s(Student's t 检验)表示。Figure 3: Identification of epicardial progenitor cells. EPC specific markers Wt1 and Tbpositively co-expressed in the cultured cells (by immunofluorescence staining), yet a singlewhich did not express the EPC markers wasshown by the white arrow. Scale bar was 50 (C): qRT-PCR analyses of Tbx18, Wt1 vs. cTnT (cardiomyocyte marker) expression in Eand cardiomyocytes (p < 0.01). The data were presented as the means ± SD of thexperiments, Student's t-test.3 讨论
本文编号：3558412
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