不同信号肽对人鼠嵌合CMV-IgM分泌表达的影响

发布时间：2021-12-31 07:10

　　为了实现在体外制备巨细胞病毒-免疫球蛋白M（CMV-IgM）和探讨不同信号肽对CMV-IgM表达的影响,通过RLM-RACE技术钓取杂交瘤细胞基因序列,构建人鼠嵌合CMV-IgM表达载体,并通过PCR方法将5种不同的分泌型信号肽（SigA–SigE）代替CMV-IgM自身信号肽（SigF）,利用中国仓鼠卵巢细胞（CHO）作为宿主细胞进行体外表达。对纯化后的CMV-IgM进行SDS-PAGE、SEC-HPLC和酶联免疫吸附试验（ELISA）确定其蛋白表达水平与免疫反应性,最终成功制备出910 kDa的重组蛋白,且研究表明,5种信号肽（SigA–SigE）的人鼠嵌合CMV-IgM表达量较CMV 6#细胞株自身信号肽SigF相比,分别提高了6.72、5.19、1.44、1.85、1.98倍。这将对人鼠嵌合CMV-IgM的开发提供理论基础,且为提高CMV-IgM表达量的研究工作提供了新思路。 

【文章来源】：生物工程学报. 2020,36(06)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

人鼠嵌合CMV-IgM真核表达载体的构建

细胞转染后，隔天开始监测细胞密度与存活率(图3A–B)，结果显示：人鼠嵌合CMV-IgM转染Expi CHO细胞后，第1天细胞密度达到高峰期(9.6×106 cells/mL)，随后细胞密度与存活率均开始逐步下降，第9天收获目的蛋白。经Protein L柱纯化后，根据蛋白纯度换算其表达量，结果表明：在本研究6种信号肽比较中，A信号肽引导CMV-IgM分泌的能力最强，自身信号肽F引导目的蛋白分泌的能力最弱，表达量最高相差6.72倍(图3C)。图3 细胞状态与蛋白表达(A：活细胞密度；B：细胞存活率；C：各自信号肽分泌蛋白的表达量，n=3)

细胞状态与蛋白表达(A：活细胞密度；B：细胞存活率；C：各自信号肽分泌蛋白的表达量，n=3)


本文编号：3559839