甲基-CpG结合蛋白1缺失小鼠抑制背根神经节与脊髓背角降钙素基因相关肽生成缓解炎性疼痛
发布时间：2022-01-03 21:33
目的探讨甲基-CpG结合蛋白1（methyl-CpG-binding domain protein 1,MBD1）缺失小鼠缓解弗氏完全佐剂（CFA）诱导的炎性疼痛是否通过抑制神经传导通路中的降钙素基因相关肽（CGRP）来实现的,为MBD1调控炎性疼痛的神经生物学机制提供新的思路。方法 （1）取8周龄雄性MBD1敲除小鼠（KO）和与KO小鼠年龄、性别和体质量配对C57BL6小鼠（WT）,按随机数字表法分为4组,分别为做足底注射生理盐水（NS）、CFA的WT小鼠组和注射NS、CFA的KO小鼠组（每组7只）。观察药物前1天（-1 d）、注射后2 h、1、3、7和14 d 4组小鼠机械缩足反应频率（PWF）和热缩足反应潜伏期（PWL）行为改变;（2）另取CFA注射后1 d（疼痛最明显点）上述组小鼠（每组3只）,分别提取患侧背根神经节（DRG）和脊髓背角组织行ELISA法检测CGRP含量,比较4组含量变化。结果 （1）与WT小鼠比较,KO小鼠CFA注射前明显降低双侧后爪基础PWF和延长PWL;与注射生理盐水的WT小鼠组比较,CFA注射后2 h、1、3、7和14 d WT小鼠患侧PWF增加（P &...
【文章来源】：实用医学杂志. 2020,36(04)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
4 组小鼠患侧PWF的比较（n=7)
4 组小鼠对侧PWF的比较（n=7)
由美国罗格斯大学新泽西医学院提供的只雄小鼠（纯合子）和只雌小鼠（杂合子），该小鼠的遗传背景为C57BL/6。因雌MBD1-/-纯合子小鼠生育力极低，本研究采用一只MBD1-/-纯合子雄鼠和一只MBD1+/-杂合子雌鼠同居交配繁育的方式进行繁殖。新生小鼠出生第5～7 d时，无菌条件下将小鼠距离尾端3 mm的鼠尾组织剪断，标记后置于离心管中。每个离心管中各加入600μL 50 mmol/L的NaOH溶液，置于99℃金属浴中煮20 min。冷却至室温后，将每个离心管中各加入100μL 1M Tris-HCl(pH-7.4），混匀后转移到离心机中以10 000 g离心管5 min。转移上清100μL至新的离心管中可存于-20℃冰箱备用。18μL PCR反应体系：GoTaq Green Master Mix,2×（Promega公司，M7122)9.0μL，上下游引物混合物1μL,DNA模板2μL,dH2O 6.0μL。反应条件为：第1步94°C 1 min预变性，第2步94℃变性1 min,63℃退火1 min,72℃延伸1 min，共40个循环，第3步72℃5 min，第4步冷却到20℃后反应结束。取10μL PCR产物加入含6μL溴化乙啶的100 mL电泳缓冲液制备的2%琼脂糖胶板上样孔内，电泳槽中电泳（135 V)20 min，然后置入凝胶成像仪中进行成像保存并观察电泳条带，依照特定的基因条带对各个小鼠的基因型进行鉴定（图1）。基因型鉴定引物序列：WT正义链5"-TCTTCTCAGACTGAGGAAGGGTGA-3"，反义链：5"-CAAGGTCCAACGCCACTGAACAT-3",350 bp;KO正义链：5"-GGATTCTCCGTGGGAACAAACG-3"，反义链：5"-CAAGGTCCAACGCCACTGAACAT-3",450 bp。1.3 CFA慢性炎性痛模型制备
【参考文献】：
期刊论文
[1]帕瑞昔布钠对神经病理性疼痛大鼠脊髓胶质细胞活化的影响[J]. 邓慧,周扬,徐岩,杨静,扶超,屠伟峰. 实用医学杂志. 2019(16)
[2]神经病理性痛小鼠背根神经节γ氨基丁酸受体亚型基因表达的变化[J]. 磨凯,郭雯静,徐世元. 中华麻醉学杂志. 2018 (09)
本文编号：3567016
【文章来源】：实用医学杂志. 2020,36(04)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
4 组小鼠患侧PWF的比较（n=7)
4 组小鼠对侧PWF的比较（n=7)
由美国罗格斯大学新泽西医学院提供的只雄小鼠（纯合子）和只雌小鼠（杂合子），该小鼠的遗传背景为C57BL/6。因雌MBD1-/-纯合子小鼠生育力极低，本研究采用一只MBD1-/-纯合子雄鼠和一只MBD1+/-杂合子雌鼠同居交配繁育的方式进行繁殖。新生小鼠出生第5～7 d时，无菌条件下将小鼠距离尾端3 mm的鼠尾组织剪断，标记后置于离心管中。每个离心管中各加入600μL 50 mmol/L的NaOH溶液，置于99℃金属浴中煮20 min。冷却至室温后，将每个离心管中各加入100μL 1M Tris-HCl(pH-7.4），混匀后转移到离心机中以10 000 g离心管5 min。转移上清100μL至新的离心管中可存于-20℃冰箱备用。18μL PCR反应体系：GoTaq Green Master Mix,2×（Promega公司，M7122)9.0μL，上下游引物混合物1μL,DNA模板2μL,dH2O 6.0μL。反应条件为：第1步94°C 1 min预变性，第2步94℃变性1 min,63℃退火1 min,72℃延伸1 min，共40个循环，第3步72℃5 min，第4步冷却到20℃后反应结束。取10μL PCR产物加入含6μL溴化乙啶的100 mL电泳缓冲液制备的2%琼脂糖胶板上样孔内，电泳槽中电泳（135 V)20 min，然后置入凝胶成像仪中进行成像保存并观察电泳条带，依照特定的基因条带对各个小鼠的基因型进行鉴定（图1）。基因型鉴定引物序列：WT正义链5"-TCTTCTCAGACTGAGGAAGGGTGA-3"，反义链：5"-CAAGGTCCAACGCCACTGAACAT-3",350 bp;KO正义链：5"-GGATTCTCCGTGGGAACAAACG-3"，反义链：5"-CAAGGTCCAACGCCACTGAACAT-3",450 bp。1.3 CFA慢性炎性痛模型制备
【参考文献】：
期刊论文
[1]帕瑞昔布钠对神经病理性疼痛大鼠脊髓胶质细胞活化的影响[J]. 邓慧,周扬,徐岩,杨静,扶超,屠伟峰. 实用医学杂志. 2019(16)
[2]神经病理性痛小鼠背根神经节γ氨基丁酸受体亚型基因表达的变化[J]. 磨凯,郭雯静,徐世元. 中华麻醉学杂志. 2018 (09)
本文编号：3567016
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