新型冠状病毒RNA标准物质

发布时间：2022-01-06 11:56

　　研制了一种新型冠状病毒（coronavirus, SARS-CoV-2）体外转录RNA标准物质,用于SARS-CoV-2病毒RNA检测的量值溯源.目标基因范围涵盖已公布的SARS-CoV-2病毒检测的3个主要靶标基因:核壳蛋白N基因全长（基因组坐标:28274-29533, GenBank:MT027064.1）、包膜蛋白E基因全长（基因组坐标:26245-26472, GenBank:MT027064.1）、开放阅读框1ab（ORF1ab）基因片段（基因组坐标:13321-15540, GenBank:MT027064.1）.通过采用数字聚合酶链式反应（digital PCR, dPCR）方法进行多实验室联合定值,确定了该标准物质的量值为N、E和ORF1ab基因的拷贝数浓度.研究结果表明,该RNA标准物质量值可靠,均匀性良好,稳定性可满足运输要求.进一步地,通过在临床检验、多家不同原理的病毒检测试剂盒生产企业、方法开发实验室等试用,验证了RNA标准物质的普适性.这一RNA标准物质的研制为新型冠状病毒检测试剂盒的质量控制提供了计量学依据,为防控流行性疾病提供了便利. 

【文章来源】：科学通报. 2020,65(22)北大核心EICSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

(网络版彩色)SARS-CoV-2 RNA标准物质生物分析仪分析结果.(a)生物分析仪分析标准物质中3个RNA分子的条带图(带L:RNA ladder;条带1～2:N基因RNA片段;条带3～4:E基因RNA片段;条带5～6:ORF1ab RNA片段);(b)生物分析仪分析标准物质中3个RNA分子的归一化峰图

图1(网络版彩色)SARS-CoV-2 RNA标准物质生物分析仪分析结果.(a)生物分析仪分析标准物质中3个RNA分子的条带图(带L:RNA ladder;条带1～2:N基因RNA片段;条带3～4:E基因RNA片段;条带5～6:ORF1ab RNA片段);(b)生物分析仪分析标准物质中3个RNA分子的归一化峰图2.3 RNA标准物质均匀性分析结果

为确保RNA在运输条件下(干冰运输)的稳定,对RNA标准物质进行短期稳定性考察[22].考察了RNA标准物质在4和-20°C条件下保存13 d的短期稳定性.实验中利用dPCR法测定标物的拷贝数浓度,将各基因的拷贝数浓度采用线性模型进行分析(此处以E基因的变化情况为例).RNA标准物质在-20和4°C温度条件下的短期稳定性统计结果表明斜率不显著(图4(c),(d)).同时,如果比较E基因首次dPCR定值结果,及其在-20和4°C保存13 d之后的dPCR定值结果,发现-20°C保存后P值为0.644,在4°C保存后P值为0.445,P值均大于0.05说明RNA标准物质在-20和4°C下保存后,量值没有发生显著变化,证明可以在4°C条件下保存13 d,足够满足样品冷链运输需求.2.5 dPCR多家单位联合定值分析及不确定度评估

【参考文献】：
期刊论文
[1]新型冠状病毒核酸检测分析[J]. 李振昊,高小玲,杨小娟,徐辉.  检验医学与临床. 2020(10)
[2]2019新型冠状病毒信息库[J]. 赵文明,宋述慧,陈梅丽,邹东,马利娜,马英克,李茹姣,郝丽丽,李翠萍,田东梅,唐碧霞,王彦青,朱军伟,陈焕新,章张,薛勇彪,鲍一明.  遗传. 2020(02)



本文编号：3572408