金黄色葡萄球菌RNAⅢ敲除株对γ-溶血素表达调控的影响

发布时间：2022-01-13 11:42

　　目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌Newman RNAⅢ基因敲除株,探究RNAⅢ敲除对金葡菌γ-溶血素表达调控的影响。方法分别扩增RNAⅢ基因的上下游同源臂,根据同源重组原理,构建pBT2基因敲除载体,利用同源重组技术,构建RNAⅢ敲除株。并对野生株和敲除株γ-溶血素的转录水平和蛋白水平进行研究。结果实时荧光定量PCR结果显示RNAⅢ敲除株γ-溶血素A/B/C亚基的转录水平较野生株显著降低, Western blot检测结果也显示敲除株γ-溶血素蛋白表达水平较野生株明显减少。结论 RNAⅢ敲除可显著影响金葡菌γ-溶血素的表达。 

【文章来源】：第三军医大学学报. 2020,42(01)北大核心CSCD

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【部分图文】：

pBT2∷ΔRNAⅢ重组质粒构建

△RNAⅢ/Newman敲除株的PCR鉴定

培养Newman野生株及RNAⅢ敲除株,于对数生长期收集菌液,离心集菌后提取细菌总RNA,逆转录生成cDNA,采用实时荧光定量PCR技术对γ-溶血素亚基hlgA、hlgBC基因的转录水平进行分析。结果表明RNAⅢ敲除后,hlgA、hlgBC(hlg2)的表达均显著下调(P<0.01,图3),证明RNAⅢ可以正调控γ-溶血素的转录。2.4 △RNAⅢ/Newman敲除株培养上清蛋白分析


本文编号：3586356