RIPK1介导的程序性坏死在LPS促进巨噬细胞释放mtDNA中的作用
发布时间：2022-01-16 03:22
目的循环中游离线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）是脓毒症后免疫抑制的关键分子,巨噬细胞mtDNA是循环中游离mtDNA的主要来源之一,本研究拟探讨程序性坏死在巨噬细胞释放mtDNA中的作用。方法用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）构建小鼠巨噬细胞mtDNA释放的细胞模型。分别应用凋亡抑制剂z-VAD、RIPK1特异性抑制剂Nec-1、RIPK3特异性抑制剂GSK’872处理细胞1h后,然后LPS处理24h。观察LPS处理巨噬细胞后mtDNA、核DNA释放情况的分组为:Control组（灭菌水）、1μg/ml LPS组;观察LPS处理巨噬细胞后程序性坏死发生情况的分组为:Control组（DMSO）、z-VAD组、Nec-1组、GSK’872组、1μg/ml LPS组、z-VAD+1μg/ml LPS组、Nec-1+1μg/ml LPS组、GSK’872+1μg/ml LPS组;观察程序性坏死在mtDNA释放中的作用的分组为:Control组（DMSO）、Nec-1组、GSK’872组、Nec-1+1μg/ml LPS组、GSK’872+1...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LPS促进巨噬细胞线粒体DNA、核DNA释放到胞外
macrophages for 24h. qPCR was used to measure the release of extracellular mitochogenes D-LOOP/COX I and nuclear gene 18S. The cycle threshold (Ct value) displayresult. The lower the Ct value is, the higher the DNA content is. Mean±SD. n=3, **P<0Control group.2.2 LPS 促进巨噬细胞 mtDNA 释放到胞浆应激发生后，mtDNA、核 DNA 从胞浆释放到胞外，那么其在胞浆中是变化的呢？1μg/ml LPS 处理巨噬细胞 24h 后，应用 qPCR 方法检测胞浆 D量， Ct 值表示结果，Ct 值越低，DNA 含量越高。实验发现，胞浆中线粒体D-LOOP/COX I、核基因 18S 分泌量增加（图 2. D-LOOP 组：LPS vs. Co＜0.05，COX I 组：LPS vs. Control P＜0.05，18S 组：LPS vs. Control P＞P value=0.05）。然后观察胞浆中线粒体 DNA 与核 DNA 的含量是否也存在差实验发现胞浆中线粒体基因 D-LOOP/COXI 含量高于核基因 18S（图 2.D-vs. 18S P＜0.01，COX I vs. 18S P＜0.01；P value=0.05）。
重庆医科大学硕士研究生学位论文value is, the higher the DNA content is. Mean±SD. n=3, *P<0.05 vs. C2.3 LPS 促进巨噬细胞 mtDNA 拷贝数增加LPS 刺激巨噬细胞后，mtDNA、核 DNA 分泌到胞浆、胞外应激状态下，对胞内 DNA 的拷贝合成影响如何？1μg/ml LPS 处后，应用实时荧光定量 PCR（qPCR）方法检测胞内 DNA 拷贝数的倍数进行比较。实验发现，胞内线粒体基因 D-LOOP/COXI 拷有统计学意义；而核基因 18s 没有明显变化（图 3. D-LOOP 组：P＜0.05，COX I 组：LPS vs. Control P＜0.01，18S 组：LPS vs. CP value=0.05）
【参考文献】：
期刊论文
[1]试验序贯分析软件在Meta分析中的应用[J]. 翁鸿,李胜,曾宪涛,武珊珊,刘晴,王行环. 中国循证医学杂志. 2016(05)
[2]试验序贯分析与Meta分析所需样本量的估算[J]. 王权,田金徽,李伦,何曦冉,黄迪,葛龙,杨克虎. 兰州大学学报(医学版). 2015(04)
[3]系统综述或Meta分析的样本量估算——试验序贯分析[J]. 夏芸,孙瑛,刘兆兰,刘建平. 北京中医药大学学报(中医临床版). 2013(05)
本文编号：3591839
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LPS促进巨噬细胞线粒体DNA、核DNA释放到胞外
macrophages for 24h. qPCR was used to measure the release of extracellular mitochogenes D-LOOP/COX I and nuclear gene 18S. The cycle threshold (Ct value) displayresult. The lower the Ct value is, the higher the DNA content is. Mean±SD. n=3, **P<0Control group.2.2 LPS 促进巨噬细胞 mtDNA 释放到胞浆应激发生后，mtDNA、核 DNA 从胞浆释放到胞外，那么其在胞浆中是变化的呢？1μg/ml LPS 处理巨噬细胞 24h 后，应用 qPCR 方法检测胞浆 D量， Ct 值表示结果，Ct 值越低，DNA 含量越高。实验发现，胞浆中线粒体D-LOOP/COX I、核基因 18S 分泌量增加（图 2. D-LOOP 组：LPS vs. Co＜0.05，COX I 组：LPS vs. Control P＜0.05，18S 组：LPS vs. Control P＞P value=0.05）。然后观察胞浆中线粒体 DNA 与核 DNA 的含量是否也存在差实验发现胞浆中线粒体基因 D-LOOP/COXI 含量高于核基因 18S（图 2.D-vs. 18S P＜0.01，COX I vs. 18S P＜0.01；P value=0.05）。
重庆医科大学硕士研究生学位论文value is, the higher the DNA content is. Mean±SD. n=3, *P<0.05 vs. C2.3 LPS 促进巨噬细胞 mtDNA 拷贝数增加LPS 刺激巨噬细胞后，mtDNA、核 DNA 分泌到胞浆、胞外应激状态下，对胞内 DNA 的拷贝合成影响如何？1μg/ml LPS 处后，应用实时荧光定量 PCR（qPCR）方法检测胞内 DNA 拷贝数的倍数进行比较。实验发现，胞内线粒体基因 D-LOOP/COXI 拷有统计学意义；而核基因 18s 没有明显变化（图 3. D-LOOP 组：P＜0.05，COX I 组：LPS vs. Control P＜0.01，18S 组：LPS vs. CP value=0.05）
【参考文献】：
期刊论文
[1]试验序贯分析软件在Meta分析中的应用[J]. 翁鸿,李胜,曾宪涛,武珊珊,刘晴,王行环. 中国循证医学杂志. 2016(05)
[2]试验序贯分析与Meta分析所需样本量的估算[J]. 王权,田金徽,李伦,何曦冉,黄迪,葛龙,杨克虎. 兰州大学学报(医学版). 2015(04)
[3]系统综述或Meta分析的样本量估算——试验序贯分析[J]. 夏芸,孙瑛,刘兆兰,刘建平. 北京中医药大学学报(中医临床版). 2013(05)
本文编号：3591839
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