细粒棘球蚴原头节miR-71的分泌表达特征分析

发布时间：2022-01-18 22:12

　　目的分析在胰岛素、阿苯达唑和人工胃液刺激下,细粒棘球蚴原头节miR-71的分泌表达特征。方法从新疆屠宰场采集绵羊肝、肺细粒棘球蚴包囊,经固定、包埋及切片后,用miR-71探针进行杂交。与异硫氰酸荧光素（FITC）标记的抗Digoxin抗体（Anti-Digoxin-FITC）作用,经4’, 6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）核酸染料染色后,在荧光显微镜下观察miR-71在包囊壁和原头节中的定位,分析miR-71在原头节中的分布,确定miR-71在原头节中的表达情况。在人工胃液（人工胃液组）、胰岛素（胰岛素组）或阿苯达唑（阿苯达唑组）等不同条件下培养原头节,收集上清并用差速离心法分离外泌体,采用透射电镜观察外泌体形态结构,利用纳米粒径分析仪测定外泌体的粒径分布;利用外泌体生物标志分子烯醇化酶和14-3-3蛋白的抗体蛋白质免疫印迹（Western blotting）鉴定外泌体;采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测外泌体中miR-71的丰度。结果原位杂交结果显示,miR-71在囊壁生发层和原头节中均有表达。人工胃液组、胰岛素组和阿苯达唑组原头节分泌的外泌体粒径分别为48.9、 49.7和... 

【文章来源】：中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2020,38(02)北大核心CSCD

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【图文】：

原位杂交法观察miR-71在细粒棘球蚴原头节中的表达（×400)

图1 原位杂交法观察miR-71在细粒棘球蚴原头节中的表达（×400)图3 人工胃液（A）、胰岛素（B）和阿苯达唑（C）处理后细粒棘球蚴原头节外泌体中miR-71的qPCR检测结果

图2 胰岛素、人工胃液和阿苯达唑处理的细粒棘球蚴原头节外泌体的电子显微镜(A)、Western blotting(B)和粒径(C)分析鉴定基于以上结果，可能提示以下机制：细粒棘球蚴随着寄生宿主的改变，其寄生环境也随之改变。而外部环境的刺激是推动细粒棘球蚴不断发育的重要因素。其中miR-71在细粒棘球蚴原头节中广泛表达，当虫体分别受到胰岛素、人工胃液和阿苯达唑的刺激后，其分泌表达水平也随之上升。提示miR-71是细粒棘球蚴耐受不同环境因素刺激的关键调节剂，可能在细粒棘球蚴的感染与发育过程发挥着重要的生物学功能。

【参考文献】：
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本文编号：3595683