利用纳米载体递送抗体及小干扰RNA药物用于调节机体免疫反应的研究

发布时间：2022-01-19 16:46

　　免疫系统是维持机体内部稳定健康环境的重要“守卫”,但在疾病发生、发展过程中,由于病灶部位的微环境变化和免疫系统的不稳定会导致免疫系统无法正常发挥其免疫监视、免疫清除和免疫耐受的功能,从而导致机体的保护机制失调,造成如肿瘤的免疫逃逸、自身免疫病等情况的发生。如何使机体免疫细胞恢复功能是此类疾病治疗过程中最重要的环节之一。随着免疫治疗的针对性药物研究和发展,越来越多的抗体类药物以及核酸类药物用于靶向免疫细胞来恢复免疫细胞的正常功能。但由于药物递送效率问题使其在临床应用上的治疗效果受到显著影响。如何将这些药物更准确、更高效的运送到病灶区域或免疫细胞,提高药效、降低副作用,成为药物研究者关注的问题。在本课题中,我们使用靶向不同细胞的免疫治疗方案用以针对不同疾病,并使用两种不同的纳米递送系统,分别用于递送抗体药物和siRNA药物。通过灵活使用药物功能、更高效地增强或减弱免疫细胞功能,达到抑制肿瘤生长或控制自身免疫病的目的。本课题主要分为以下两个部分:（1）我们将靶向NK细胞表面抑制性受体KLRG1的抗体和靶向肿瘤细胞表面PDL1的抗体同步结合到抗体递送的纳米适配子表面,构建得到一种能调节NK细胞... 

【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：96 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 免疫系统紊乱与治疗手段
    1.2 肿瘤免疫治疗的现状
    1.3 NK细胞与肿瘤免疫
    1.4 靶向NK细胞的肿瘤免疫治疗策略
    1.5 靶向NK细胞的抗体与抗肿瘤免疫
    1.6 抗体药物递送的困境和解决方案
    1.7 自身免疫病与免疫治疗
    1.8 靶向免疫细胞的自身免疫性疾病治疗
    1.9 纳米递送载体特性与免疫细胞靶向
    1.10 本课题选题目的及主要研究内容
    参考文献
第二章 通过纳米适配子系统携载靶向NK细胞和肿瘤细胞的免疫检查点抗体激活NK细胞肿瘤免疫功能的研究
    2.1 引言
    2.2 实验材料及方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 细胞培养和动物模型
        2.2.3 NK细胞的体外分离与培养
        2.2.4 纳米适配子纳米载体的制备和表征
        2.2.5 凝胶电泳(SDS)检测αFc抗体氧化后与PS的结合情况
        2.2.6 DLS检测纳米适配子在蔗糖溶液及FPS中的粒径稳定性
        2.2.7 MTT检测纳米适配子及免疫检查点抗体的细胞毒性
        2.2.8 流式细胞术(FACS)检测纳米适配子靶向肿瘤细胞及NK细胞的能力
        2.2.9 激光共聚焦显微镜观测纳米适配子对肿瘤细胞和NK细胞靶向作用
        2.2.10 高内涵成像系统观测及检测纳米适配子促进NK细胞对肿瘤细胞的生长抑制
        2.2.11 酶联免疫法(ELISA)检测纳米适配子对NK细胞激活释放细胞因子的影响
        2.2.12 黑色素瘤(B16-F10)的原位荷瘤小鼠模型建立及治疗
        2.2.13 三阴性乳腺癌(4T1)的原位荷瘤小鼠模型建立及治疗
        2.2.14 黑色素瘤(B16-F10)的肺部转移小鼠模型建立及治疗
        2.2.15 三阴性乳腺癌(4T1)的肺部转移小鼠模型建立及治疗
        2.2.16 免疫组化法观测肺转移模型治疗后小鼠肺部转移情况
        2.2.17 流式细胞术(FACS)检测治疗后肿瘤免疫微环境变化及细胞因子变化
        2.2.18 小鼠NK细胞清除模型及该模型下的肿瘤生长及治疗
        2.2.19 小鼠T细胞清除模型及该模型下的肿瘤生长及治疗
        2.2.20 统计学分析
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 纳米适配子的制备及表征
        2.3.2 细胞水平检测ACNA与肿瘤细胞及NK细胞的靶向结合
        2.3.3 细胞水平观测ACNA对肿瘤细胞与NK细胞相互作用的促进
        2.3.4 细胞水平检测ACNA对NK细胞的激活作用
        2.3.5 细胞水平检测ACNA对NK细胞杀伤肿瘤细胞效果的促进
        2.3.6 体内治疗检测ACNA对皮下肿瘤模型的治疗效果
        2.3.7 体内治疗检测ACNA对肺转移模型的抑制效果
        2.3.8 体内细胞清除实验检测ACNA的靶向功能细胞
    2.4 本章小结
    参考文献
第三章 阳离子脂质纳米颗粒输送靶向Bruton络氨酸激酶的小干扰RNA用于类风湿性关节炎治疗的研究
    3.1 引言
    3.2 实验材料及方法
        3.2.1 主要材料
        3.2.2 细胞系及细胞培养
        3.2.3 实验动物与胶原性关节炎小鼠模型
        3.2.4 CLAN_(siRNA)的合成和表征
        3.2.5 体外检测CLAN_(siRNA)的细胞摄取
        3.2.6 体外检测CLAN_(siBTK)下调细胞BTK表达水平
        3.2.7 体内检测CLAN的免疫细胞摄取
        3.2.8 体内检测CLAN_(siBTK)对B细胞和巨噬细胞BTK表达水平的下调
        3.2.9 CLAN_(siBTK)对胶原诱导性关节炎的治疗
        3.2.10 统计学分析
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 阳离子纳米颗粒促进免疫细胞的摄取
        3.3.2 CLAN_(siRNA)的制备和表征
        3.3.3 体外检测CLAN_(siBTK)对B细胞和巨噬细胞BTK基因表达的沉默
        3.3.4 CLAN_(siBTK)对CIA的治疗
        3.3.5 CLAN_(siBTK)治疗后CIA模型小鼠的促炎性因子表达水平变化
    3.4 本章小结
    参考文献
附录一 主要仪器设备
附录二 常规试剂
附录三 主要溶液配制
附录四 常规实验方法
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]Immunotherapy in gastric cancer[J]. Satoko Matsueda,David Y Graham.  World Journal of Gastroenterology. 2014(07)



本文编号：3597211