久泻灵颗粒对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠TLR4、NF-κB p65及炎性细胞因子表达的影响

发布时间：2017-05-12 15:20

  本文关键词：久泻灵颗粒对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠TLR4、NF-κB p65及炎性细胞因子表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的阐明久泻灵颗粒对脾肾阳虚型UC模型大鼠结肠组织病理形态变化的影响以及对IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ炎症因子和TLR4、NF-κB p65蛋白基因表达的影响,初步阐释以温补脾肾法为指导的中药制剂久泻灵颗粒治疗UC的作用机理和科学内涵,为临床治疗UC用药的探讨提供有效的理论依据。方法1将60只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组和模型组,采用灌服大黄水煎液加肌肉注射氢化可的松的方法建立中医证型“脾肾阳虚”模型,同时结合TNBS(2,4,6-三硝基苯磺酸)加50%乙醇混合灌肠法建立西医病“UC”模型。造模成功后将模型组随机分为脾肾阳虚型UC模型7天、14天、21天组,取材后进行结肠组织病理切片制备,采用ELISA法检测FT3、FT4、T的含量。2将90只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组和模型组,造模方法和实验一相同。造模成功后将模型组随机分为脾肾阳虚型UC模型组、久泻灵颗粒治疗7天、14天、21天组和阳性对照组(SASP组)。久泻灵颗粒治疗组按各组要求分别给药7天、14天、21天,阳性对照组给予柳氮磺胺吡啶治疗。取材后选用病理学方法(肉眼观察和HE染色镜下观察)来观察各组大鼠结肠组织病理形态变化、ELISA法检测大鼠血清及组织中IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量、免疫组化法检测大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB p65蛋白表达、RT-q PCR法检测大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB p65基因的表达。结果1 ELISA法检测大鼠血清中FT3、FT4、T的含量:与空白组比较,模型7天、14天、21天组中FT3、FT4、T的含量均有所降低,其中模型21天组差异显著(P0.01)。2 ELISA法检测大鼠血清及组织中IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量:与空白组比较,UC模型组中IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量均有所升高,具有显著性差异(P0.01);与模型组比较,久泻灵颗粒治疗7天、14天、21天组及阳性对照组中各炎症因子的含量均有所降低(P0.01或P0.05),且以中药治疗21天组差异最为显著(P0.01)。3 RT-q PCR法检测大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB p65 m RNA表达:与模型组比较,空白组结肠组织中TLR4、NF-κB p65 m RNA表达量明显低于模型组(P0.01),差异有统计学意义;久泻灵颗粒治疗7天、14天、21天组结肠组织中TLR4、NF-κB p65 m RNA表达量均有所降低(P0.01或P0.05)。4免疫组化法检测大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB p65蛋白表达:TLR4表达:(1)镜下观察可见:模型组大鼠肠粘膜上皮和固有层单个核细胞都有TLR4阳性表达,表达强度高于空白组,并且越接近肠腔表达越强。其余各治疗组大鼠TLR4呈弱度或中等强度表达。(2)TLR4阳性细胞灰度值结果为:与空白组比较,模型组大鼠结肠组织中TLR4表达显著增强(P0.01),差异有统计学意义;与模型组比较,治疗后其他各组TLR4表达均有所减弱(P0.01或P0.05)。NF-κB p65表达:(1)镜下观察可见:模型组中NF-κB p65阳性表达为单核-巨噬细胞,呈现胞浆阳性,大鼠结肠粘膜上皮和固有层单个核细胞中都可以见到,表达强度明显高于空白组。其余各治疗组大鼠NF-κB p65阳性细胞呈弱度或中等强度表达。(2)NF-κB p65阳性细胞灰度值结果为:与空白组比较,模型组NF-κB p65表达显著增强(P0.01),差异有统计学意义;与模型组比较,治疗后各组NF-κB p65表达显著减弱(P0.01或P0.05)。结论1脾肾阳虚是UC反复发病,病情迁延难愈的关键病机,以温补脾肾法为指导的久泻灵颗粒治疗UC疗效显著,为临床用药提供了有效依据。2久泻灵颗粒可以明显降低脾肾阳虚型UC模型大鼠血清及结肠组织中IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ炎症因子的含量,进而抑制炎性细胞浸润,减少炎症活性产物的释放,减轻机体肠粘膜的炎症反应和组织损伤程度,促进肠粘膜修复。3久泻灵颗粒可以明显降低脾肾阳虚型UC模型大鼠中TLR4、NF-κB p65基因的转录和蛋白的表达,减轻粘膜炎症反应,促进肠粘膜修复。
【关键词】：溃疡性结肠炎 IL-1 IL-6 TNF-α IFN-γ TLR4 NF-κB p65 久泻灵颗粒
【学位授予单位】：甘肃中医药大学(原名：甘肃中医学院)
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5;R-332
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英文缩略词表10-11
• 前言11-13
• 立题依据13-14
• 第一部分 理论研究14-22
• 1 中医学关于UC的研究14-18
• 1.1 病名范畴14
• 1.2 病因病机14-16
• 1.3 辨证论治16-17
• 1.4 中医治疗17-18
• 2 现代医学关于UC的研究18-22
• 2.1 流行病学研究18-19
• 2.2 病因及发病机理19-20
• 2.3 西医治疗20-22
• 第二部分 实验研究22-51
• 1 实验一22-27
• 1.1 技术路线图22-23
• 1.2 实验材料23
• 1.3 实验方法23-25
• 1.4 实验结果25-27
• 2 实验二27-44
• 2.1 技术路线图27-28
• 2.2 实验材料28-29
• 2.3 实验方法29-34
• 2.4 实验结果34-44
• 3 讨论44-51
• 3.1 模型制备方法的选择44
• 3.2 脾肾阳虚型UC模型评估44-45
• 3.3 久泻灵颗粒组方分析45
• 3.4 大鼠结肠组织病理切片结果分析45-46
• 3.5 炎症因子与 UC（IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ）46-48
• 3.6 TLR4、NF-κB p65 与UC48-51
• 结论51-52
• 参考 文献52-59
• 附录59-64
• 附录1 实验一大鼠病变结肠组织病理切片59-60
• 附录2 实验二大鼠病变结肠组织病理切片60-61
• 附录3 大鼠病变结肠组织免疫组化切片61-63
• 附录4 实验动物质量合格证和设施使用许可证63-64
• 致谢64-65
• 攻读硕士研究生阶段发表的论文65

【参考文献】

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本文编号：360155