基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨27nt-miRNA对血管平滑肌细胞自噬的调控作用
发布时间：2022-01-22 09:46
目的探讨27nt-miRNA对西罗莫司诱导的血管平滑肌细胞自噬的调控作用及分子机制。方法将大鼠主动脉血管平滑肌细胞分为正常组、西罗莫司组、27nt-miRNA组、anti-27nt-miRNA组和阴性对照组。正常组给予正常培养;西罗莫司组用100 nmol·L-1西罗莫司作用6 h建立自噬模型;27nt-miRNA组、anti-27nt-miRNA组及阴性对照组先转染相应慢病毒载体,待转染成功后用100 nmol·L-1西罗莫司作用6 h建立自噬模型。用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法验证27nt-miRNA慢病毒稳转细胞株构建情况,用透射电镜观察5组细胞内部自噬小体数量,用四甲基偶氮唑盐法检测5组细胞活性,用Western blot法与qRT-PCR法检测LC3-Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1、PI3K、Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR的蛋白和mRNA表达水平。结果慢病毒转染细胞成功后27nt-miRNA的表达受到影响;与阴性对照组相比,细胞内自噬小体及自噬溶酶体显著增多,27nt-miRNA组细胞的活性显著增强[（0.90...
【文章来源】：中国临床药理学杂志. 2020,36(02)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
透射电镜观察5组细胞超微结构与自噬小体数量结果(×2.5×104)
Akt、mTOR在各组间细胞中表达无显著性差异(P>0.05)。与正常组比较,西罗莫司组与阴性对照组的PI3K、p-Akt、p-mTOR表达量均显著降低(均P<0.05),且后两组间比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。与阴性对照组比较,27nt-miRNA组的PI3K、p-Akt、p-mTOR表达量均显著降低(均P<0.05),anti-27nt-miRNA组的PI3K、p-Akt、p-mTOR表达量差异均无统计学意义(均P>0.05),提示在西罗莫司诱导细胞自噬后,上调27nt-miRNA表达量可通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进细胞进一步上调自噬水平。表1 比较5组细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路关键蛋白表达量的结果 (n=3, x ˉ ±s) Table 1 Comparison of the key proteins relative expression levels of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway among five groups (n=3, x ˉ ±s) Item Normal Rapamycin 27nt-miRNA Anti-27nt-miRNA Negative control PI3K 0.37± 0.02 0.27± 0.02* 0.14± 0.04*# 0.26± 0.03* 0.25± 0.04* Akt 0.85± 0.05 0.84± 0.04 0.89± 0.03 0.90± 0.02 0.88± 0.05 p-Akt 0.61± 0.07 0.51± 0.02* 0.41± 0.02*# 0.50± 0.01* 0.52± 0.02* mTOR 0.38± 0.01 0.37± 0.04 0.41± 0.01 0.39± 0.05 0.39± 0.08 p-mTOR 0.16± 0.02 0.13± 0.01* 0.07± 0.00*# 0.14± 0.01* 0.14± 0.00* Compared with normal group,*P<0.05; Compared with negative control group, #P<0.05
【参考文献】：
期刊论文
[1]微小RNA在心脏传导系统中的研究现状[J]. 朱烟朦,谢冰鑫,孙丽华. 中国临床药理学杂志. 2019(19)
[2]脂肪酸合成酶抑制剂TVB-2640对膀胱癌细胞的影响研究[J]. 颜新建,李高峰,吴添雨,唐梅. 中国临床药理学杂志. 2019(18)
[3]27nt-miRNA对血管平滑肌细胞SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响[J]. 沈凤,杨鹏,陶晓静,李丹,颜渊鸳,罗雪兰,秦祖杰,覃裕旺,欧和生. 中国病理生理杂志. 2019(02)
[4]姜黄素对大鼠坐骨神经损伤后神经再生过程中细胞自噬的影响[J]. 李凯,马锴. 中国临床药理学杂志. 2019(04)
[5]粉防己碱对小鼠肺成纤维细胞的凋亡及Caspase-3蛋白的影响[J]. 梁晓飞,王铭,肖永红. 中国临床药理学杂志. 2016(06)
本文编号：3601970
【文章来源】：中国临床药理学杂志. 2020,36(02)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
透射电镜观察5组细胞超微结构与自噬小体数量结果(×2.5×104)
Akt、mTOR在各组间细胞中表达无显著性差异(P>0.05)。与正常组比较,西罗莫司组与阴性对照组的PI3K、p-Akt、p-mTOR表达量均显著降低(均P<0.05),且后两组间比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。与阴性对照组比较,27nt-miRNA组的PI3K、p-Akt、p-mTOR表达量均显著降低(均P<0.05),anti-27nt-miRNA组的PI3K、p-Akt、p-mTOR表达量差异均无统计学意义(均P>0.05),提示在西罗莫司诱导细胞自噬后,上调27nt-miRNA表达量可通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进细胞进一步上调自噬水平。表1 比较5组细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路关键蛋白表达量的结果 (n=3, x ˉ ±s) Table 1 Comparison of the key proteins relative expression levels of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway among five groups (n=3, x ˉ ±s) Item Normal Rapamycin 27nt-miRNA Anti-27nt-miRNA Negative control PI3K 0.37± 0.02 0.27± 0.02* 0.14± 0.04*# 0.26± 0.03* 0.25± 0.04* Akt 0.85± 0.05 0.84± 0.04 0.89± 0.03 0.90± 0.02 0.88± 0.05 p-Akt 0.61± 0.07 0.51± 0.02* 0.41± 0.02*# 0.50± 0.01* 0.52± 0.02* mTOR 0.38± 0.01 0.37± 0.04 0.41± 0.01 0.39± 0.05 0.39± 0.08 p-mTOR 0.16± 0.02 0.13± 0.01* 0.07± 0.00*# 0.14± 0.01* 0.14± 0.00* Compared with normal group,*P<0.05; Compared with negative control group, #P<0.05
【参考文献】：
期刊论文
[1]微小RNA在心脏传导系统中的研究现状[J]. 朱烟朦,谢冰鑫,孙丽华. 中国临床药理学杂志. 2019(19)
[2]脂肪酸合成酶抑制剂TVB-2640对膀胱癌细胞的影响研究[J]. 颜新建,李高峰,吴添雨,唐梅. 中国临床药理学杂志. 2019(18)
[3]27nt-miRNA对血管平滑肌细胞SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响[J]. 沈凤,杨鹏,陶晓静,李丹,颜渊鸳,罗雪兰,秦祖杰,覃裕旺,欧和生. 中国病理生理杂志. 2019(02)
[4]姜黄素对大鼠坐骨神经损伤后神经再生过程中细胞自噬的影响[J]. 李凯,马锴. 中国临床药理学杂志. 2019(04)
[5]粉防己碱对小鼠肺成纤维细胞的凋亡及Caspase-3蛋白的影响[J]. 梁晓飞,王铭,肖永红. 中国临床药理学杂志. 2016(06)
本文编号：3601970
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