残黄片对ANIT诱导黄疸模型大鼠的退黄作用机制分析
发布时间：2022-01-24 08:43
目的:考察残黄片对α-萘异硫氰酸酯（ANIT）诱导黄疸模型大鼠肝脏法尼醇X受体（FXR）,尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1（UGT1A1）和多药耐药相关蛋白2（MRP2）mRNA和蛋白表达的影响,探讨其治疗残留黄疸的作用机制。方法:大鼠分为正常组、模型组、残黄片（CHP）组和熊去氧胆酸片（UDCA）组,ANIT灌胃复制黄疸模型,相应药物干预后进行血清总胆红素（TBIL）,总胆汁酸（TBA）,丙氨酸氨基转移酶（ALT）,天门冬氨酸氨基转移酶（AST）和碱性磷酸酶（ALP）的含量检测和肝组织病理学检查,以评价残黄片的治疗作用。应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western blot）检测各组大鼠肝组织FXR,UGT1A1,MRP2 mRNA和蛋白的相对表达量。结果:CHP能显著降低由ANIT引起的大鼠血清TBIL,TBA,ALT,AST,ALP的升高,抑制肝脏病理学改变,退黄作用优于UDCA。与正常组比较,ANIT造模后显著抑制大鼠肝组织FXR,UGT1A1,MRP2的mRNA水平（P<0.01）。与模型组比较,CHP和UDCA干预后均显著提升了各蛋白...
【文章来源】：中国实验方剂学杂志. 2020,26(17)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
各组大鼠肝组织的病理观察（HE，×200)
肝脏FXR是胆汁成分的天然受体，定位于肝细胞核受体膜，对胆汁的形成和转运具有调控作用。有研究显示，FXR激动剂可诱导MRP2蛋白的表达，促进淤积的胆红素、胆汁酸盐以及有毒物质的外排[9-10]。UGT1A1主要存在于肝细胞微粒体上，可选择性催化80%的脂溶性未结合胆红素与葡萄糖醛酸结合，产生水溶性胆红素葡萄糖醛酸结合物，进而被肝细胞基底侧MRP2转运入毛细胆管，排出肝脏[11-12]。本课题组前期分子对接研究结果提示，CHP中的小檗浸碱、氢化小檗碱、穆坪马兜铃酰胺、槲皮素、去甲氧基姜黄素、桤木酮、黄柏酮、姜黄素、柚皮素和Corchoroside A共10个成分与FXR，一氧化氮合酶，三磷酸鸟苷（GTP）环化水解酶1，细胞色素P450 2E1，单胺氧化酶A等7个以上靶点作用，通过促进胆汁排泄、调节胆汁酸生成与重吸收、调控胆红素代谢、调节免疫与细胞凋亡等多个途径发挥作用[5]。相关研究显示，黄连所含生物碱对大鼠肝细胞UGT1A1蛋白有激活作用[13]，并激活FXR和提升胆汁酸盐输出泵转运蛋白（BSEP）表达而促进肝脏胆汁的排出[14]。本研究结果显示，CHP能显著提高黄疸模型大鼠肝脏UGT1A1的mRNA和蛋白表达，恢复肝细胞对游离胆红素的代谢，有助于排出肝脏。与此同时，CHP激活大鼠肝组织FXR mRNA的表达，并显著提升其下游的MRP2 mRNA和蛋白表达，促进了胆红素和胆汁酸盐排出肝脏，降低胆汁淤积引起的肝损伤。本研究结果也验证了分子对接模拟的CHP调节肝内胆红素及胆汁代谢转运相关蛋白的作用机制，填补了该制剂退黄机制研究的空白。胆汁的形成和转运不仅涉及胆红素，还与多种初级胆汁酸和次级胆汁酸的代谢转运有关。成人平均胆汁酸总量3～5 g，每天可循环5～8次，由肝脏排出的胆汁酸95%在肠道被重吸收，经门静脉回到肝脏，形成肝肠循环[15-16]。CHP成分复杂多样，其退黄机制可能不仅限于FXR及下游靶点，还可能与肝脏胆汁酸代谢酶、肝血窦膜转运蛋白以及肠道胆汁成分转运体有关。从胆汁的肝肠循环角度，借助网络药理学方法建立“疾病-基因-靶点-成分”相互作用网络，预测CHP可能的作用靶点和机制，结合成分敲入敲出和血清LC-MS分析方法进行验证，将有望全面阐释CHP退黄作用机制。
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于分子对接技术探讨残黄片退黄作用机制[J]. 吉日木巴图,范娜,王蕊,牛莹,王啸洋,韩晋. 中国实验方剂学杂志. 2019(10)
[2]基于超微粉碎工艺的残黄片质量稳定性提升[J]. 吉日木巴图,张诗龙,范娜,宋杨,王啸洋,韩晋. 中国实验方剂学杂志. 2018(12)
[3]6种黄连生物碱对鼠肝微粒体UGTs及UGT1A1活性影响的体内外研究[J]. 赵园园,苗培培,苗青,郭嫦娥,陈红影,陈宁,张玉杰,马双成. 中国中药杂志. 2016(02)
[4]ANIT诱导大鼠亚急性肝内胆汁淤积的生化和病理变化[J]. 欧巧群,钱新华,黄笑群,王辉阳. 胃肠病学和肝病学杂志. 2015(04)
[5]微粉化增溶技术在残黄片工艺中的应用[J]. 陈红鸽,韩晋,袁海龙,高春生. 中国实验方剂学杂志. 2013(13)
[6]胆红素在肝脏的代谢及调节机制研究进展[J]. 李秋红,邵勇. 肝脏. 2012(01)
[7]Physiology of bile secretion[J]. Alejandro Esteller. World Journal of Gastroenterology. 2008(37)
博士论文
[1]黄连生物碱调节高脂C57BL/6J小鼠胆汁酸信号通路和肠道微生物改善血脂异常研究[D]. 贺凯.西南大学 2017
本文编号：3606265
【文章来源】：中国实验方剂学杂志. 2020,26(17)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
各组大鼠肝组织的病理观察（HE，×200)
肝脏FXR是胆汁成分的天然受体，定位于肝细胞核受体膜，对胆汁的形成和转运具有调控作用。有研究显示，FXR激动剂可诱导MRP2蛋白的表达，促进淤积的胆红素、胆汁酸盐以及有毒物质的外排[9-10]。UGT1A1主要存在于肝细胞微粒体上，可选择性催化80%的脂溶性未结合胆红素与葡萄糖醛酸结合，产生水溶性胆红素葡萄糖醛酸结合物，进而被肝细胞基底侧MRP2转运入毛细胆管，排出肝脏[11-12]。本课题组前期分子对接研究结果提示，CHP中的小檗浸碱、氢化小檗碱、穆坪马兜铃酰胺、槲皮素、去甲氧基姜黄素、桤木酮、黄柏酮、姜黄素、柚皮素和Corchoroside A共10个成分与FXR，一氧化氮合酶，三磷酸鸟苷（GTP）环化水解酶1，细胞色素P450 2E1，单胺氧化酶A等7个以上靶点作用，通过促进胆汁排泄、调节胆汁酸生成与重吸收、调控胆红素代谢、调节免疫与细胞凋亡等多个途径发挥作用[5]。相关研究显示，黄连所含生物碱对大鼠肝细胞UGT1A1蛋白有激活作用[13]，并激活FXR和提升胆汁酸盐输出泵转运蛋白（BSEP）表达而促进肝脏胆汁的排出[14]。本研究结果显示，CHP能显著提高黄疸模型大鼠肝脏UGT1A1的mRNA和蛋白表达，恢复肝细胞对游离胆红素的代谢，有助于排出肝脏。与此同时，CHP激活大鼠肝组织FXR mRNA的表达，并显著提升其下游的MRP2 mRNA和蛋白表达，促进了胆红素和胆汁酸盐排出肝脏，降低胆汁淤积引起的肝损伤。本研究结果也验证了分子对接模拟的CHP调节肝内胆红素及胆汁代谢转运相关蛋白的作用机制，填补了该制剂退黄机制研究的空白。胆汁的形成和转运不仅涉及胆红素，还与多种初级胆汁酸和次级胆汁酸的代谢转运有关。成人平均胆汁酸总量3～5 g，每天可循环5～8次，由肝脏排出的胆汁酸95%在肠道被重吸收，经门静脉回到肝脏，形成肝肠循环[15-16]。CHP成分复杂多样，其退黄机制可能不仅限于FXR及下游靶点，还可能与肝脏胆汁酸代谢酶、肝血窦膜转运蛋白以及肠道胆汁成分转运体有关。从胆汁的肝肠循环角度，借助网络药理学方法建立“疾病-基因-靶点-成分”相互作用网络，预测CHP可能的作用靶点和机制，结合成分敲入敲出和血清LC-MS分析方法进行验证，将有望全面阐释CHP退黄作用机制。
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于分子对接技术探讨残黄片退黄作用机制[J]. 吉日木巴图,范娜,王蕊,牛莹,王啸洋,韩晋. 中国实验方剂学杂志. 2019(10)
[2]基于超微粉碎工艺的残黄片质量稳定性提升[J]. 吉日木巴图,张诗龙,范娜,宋杨,王啸洋,韩晋. 中国实验方剂学杂志. 2018(12)
[3]6种黄连生物碱对鼠肝微粒体UGTs及UGT1A1活性影响的体内外研究[J]. 赵园园,苗培培,苗青,郭嫦娥,陈红影,陈宁,张玉杰,马双成. 中国中药杂志. 2016(02)
[4]ANIT诱导大鼠亚急性肝内胆汁淤积的生化和病理变化[J]. 欧巧群,钱新华,黄笑群,王辉阳. 胃肠病学和肝病学杂志. 2015(04)
[5]微粉化增溶技术在残黄片工艺中的应用[J]. 陈红鸽,韩晋,袁海龙,高春生. 中国实验方剂学杂志. 2013(13)
[6]胆红素在肝脏的代谢及调节机制研究进展[J]. 李秋红,邵勇. 肝脏. 2012(01)
[7]Physiology of bile secretion[J]. Alejandro Esteller. World Journal of Gastroenterology. 2008(37)
博士论文
[1]黄连生物碱调节高脂C57BL/6J小鼠胆汁酸信号通路和肠道微生物改善血脂异常研究[D]. 贺凯.西南大学 2017
本文编号：3606265
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