斑马鱼药物代谢酶CYP3A65活性研究
发布时间：2022-01-25 00:28
目的:斑马鱼作为一种新型模式动物已被广泛应用于药学领域研究,但国内外关于其作为药物代谢模型的相关酶活性研究却鲜有报道。本实验通过研究不同生长阶段斑马鱼体内药物代谢酶CYP3A65 mRNA的表达,筛选出药物代谢酶表达量最高生长期的斑马鱼,以此生长期的斑马鱼为研究对象,探究其肝微粒体中药物代谢酶CYP3A65的酶活性,进而评价斑马鱼作为药物代谢模型的适用性。方法:采用实时荧光定量PCR方法,检测斑马鱼在幼年期（72 hpf,96 hpf,120 hpf,7 dpf,21 dpf）、青年期（30 dpf,45 dpf,60 dpf,75 dpf）和成年期（90dpf）三个生长阶段的全鱼以及其肝和肠组织中药物代谢酶CYP3A65 mRNA水平的表达。以NADPH-细胞色素C还原酶、红霉素-N-脱甲基酶和睾酮羟化酶的活性为指标,检测斑马鱼肝微粒体中CYP3A65的酶活性。结果:在青年期75 dpf的斑马鱼中,CYP3A65、PXR、AHR2 mRNA的表达最高,在生长发育过程中,药物代谢酶及其上游核受体的基因表达趋势也一致。对CYP3A65及其上游核受体PXR和AHR2进行相关性分析,CYP3...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞色素P450的代谢循环过程
上海海洋大学硕士学位论文CYP450 酶在自然界分布广泛，人类、动物、植物、微生物，甚至病毒等均有CYP450 的存在。1968 年首次成功从兔肝微粒体中纯化出 P450 体系，随着哺乳动物 CYP450 酶的研究，表明哺乳动物中至少存在一种以上的 CYP450 酶。随着基因组高通量测序及分析技术的发展，已知人类基因组上的 CYP450 基因数为 57 个，在其它重要模式生物如结核分枝杆菌、线虫、果蝇及植物拟南芥中都发现不同数量的 CYP450 酶基因。CYP450 酶是肝组织中药物代谢的主要酶系[30]。根据氨基酸序列的不同进行划分，CYP450 酶可分为若干家族和亚家族，其中 CYP3A 亚家族占 CYP450 酶的 30%，文献预计有 75%以上的临床药物由 CYP3A 亚家族代谢[31]。1994 年 Shimada 等对 30 例日本人及 30 例高加索人肝微粒体中 CYP450 进行定量分析（图 1-2-a）[32]。张等采用稳定同位素稀释内标-多反应监测-质谱技术（SID-MRM-MS）对 100 例中国正常人肝中 10 种 CYP450 蛋白含量进行测定，同时还对蛋白 mRNA 表达水平进行定量（图 1-2-b、1-2-c）[33]。ab c
23斑马鱼组织中 CYP3A65 和核受体 PXR、AHR2 mRNA 水平的相长阶段中，幼鱼、青年鱼和成年鱼的全部鱼组织中 CYP3A65（A表达。qRT-PCR 用于定量整个斑马鱼中的转录物的表达情况，以，其他组的样本与其比较，确定相对表达量；数据的标准差用 统计学差异由*表示（*P < 0.05, **P < 0.01, ***P< 0.001）lative mRNA expression levels of CYP3A65 and nuclear receptor PXdanio rerio . Note:CYP3A65(A), PXR(B) andAHR2(C) gene expressienile fish and adult fish were detected during developmental stages; qRy transcript expression in whole danio rerio; relative fold was determi
【参考文献】：
期刊论文
[1]斑马鱼在药学领域的应用研究[J]. 祁美娟,石美智,韩永龙. 中国药理学通报. 2018(07)
[2]斑马鱼平台研究七种中药单体的降脂作用[J]. 陈侃,王长谦,范虞琪,韩志华,汪月,高霖,曾华甦. 生理学报. 2017(01)
[3]大鼠肝微粒体中睾酮及其代谢产物6β-羟基睾酮的高效液相色谱检测方法的改进[J]. 赵燕燕,柳亚飞,刘丽艳,孙东,王静. 河北大学学报(自然科学版). 2016(01)
[4]斑马鱼药物代谢模型的适用性研究进展[J]. 宁青,韦英杰,王丹丹,贾晓斌,谢林. 中草药. 2015(08)
[5]细胞色素P450 3A4代谢机制有关方面的研究进展[J]. 黄伟,胡晓. 中国临床药理学与治疗学. 2015(02)
[6]细胞色素P450CYP3A65斑马鱼模型建立及对环境污染物的生物响应[J]. 李春杰,赵建,张世勇,潘微彤,蒲韵竹,贾启燕,查晓丹,尚艳楠,黄春倩,刘艳琴,钟玉绪,李前,丁日高,付爱玲,赵宝全. 中国药理学与毒理学杂志. 2014(06)
[7]斑马鱼在再生医学研究中的应用及进展[J]. 严丽锋,顾爱华. 遗传. 2013(07)
[8]斑马鱼胚胎和肿瘤细胞评价细胞毒药物活性比较研究[J]. 张红翠,王晓伟,徐晓敏,鲁疆,安晓晶,许波,马成俊,张红,王振华. 现代生物医学进展. 2012(27)
[9]斑马鱼模型在药物筛选中的应用[J]. 辛胜昌,赵艳秋,李松,林硕,仲寒冰. 遗传. 2012(09)
[10]斑马鱼在药物代谢中的研究进展[J]. 陈秋霞,曾苏. 药学学报. 2011(09)
本文编号：3607573
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞色素P450的代谢循环过程
上海海洋大学硕士学位论文CYP450 酶在自然界分布广泛，人类、动物、植物、微生物，甚至病毒等均有CYP450 的存在。1968 年首次成功从兔肝微粒体中纯化出 P450 体系，随着哺乳动物 CYP450 酶的研究，表明哺乳动物中至少存在一种以上的 CYP450 酶。随着基因组高通量测序及分析技术的发展，已知人类基因组上的 CYP450 基因数为 57 个，在其它重要模式生物如结核分枝杆菌、线虫、果蝇及植物拟南芥中都发现不同数量的 CYP450 酶基因。CYP450 酶是肝组织中药物代谢的主要酶系[30]。根据氨基酸序列的不同进行划分，CYP450 酶可分为若干家族和亚家族，其中 CYP3A 亚家族占 CYP450 酶的 30%，文献预计有 75%以上的临床药物由 CYP3A 亚家族代谢[31]。1994 年 Shimada 等对 30 例日本人及 30 例高加索人肝微粒体中 CYP450 进行定量分析（图 1-2-a）[32]。张等采用稳定同位素稀释内标-多反应监测-质谱技术（SID-MRM-MS）对 100 例中国正常人肝中 10 种 CYP450 蛋白含量进行测定，同时还对蛋白 mRNA 表达水平进行定量（图 1-2-b、1-2-c）[33]。ab c
23斑马鱼组织中 CYP3A65 和核受体 PXR、AHR2 mRNA 水平的相长阶段中，幼鱼、青年鱼和成年鱼的全部鱼组织中 CYP3A65（A表达。qRT-PCR 用于定量整个斑马鱼中的转录物的表达情况，以，其他组的样本与其比较，确定相对表达量；数据的标准差用 统计学差异由*表示（*P < 0.05, **P < 0.01, ***P< 0.001）lative mRNA expression levels of CYP3A65 and nuclear receptor PXdanio rerio . Note:CYP3A65(A), PXR(B) andAHR2(C) gene expressienile fish and adult fish were detected during developmental stages; qRy transcript expression in whole danio rerio; relative fold was determi
【参考文献】：
期刊论文
[1]斑马鱼在药学领域的应用研究[J]. 祁美娟,石美智,韩永龙. 中国药理学通报. 2018(07)
[2]斑马鱼平台研究七种中药单体的降脂作用[J]. 陈侃,王长谦,范虞琪,韩志华,汪月,高霖,曾华甦. 生理学报. 2017(01)
[3]大鼠肝微粒体中睾酮及其代谢产物6β-羟基睾酮的高效液相色谱检测方法的改进[J]. 赵燕燕,柳亚飞,刘丽艳,孙东,王静. 河北大学学报(自然科学版). 2016(01)
[4]斑马鱼药物代谢模型的适用性研究进展[J]. 宁青,韦英杰,王丹丹,贾晓斌,谢林. 中草药. 2015(08)
[5]细胞色素P450 3A4代谢机制有关方面的研究进展[J]. 黄伟,胡晓. 中国临床药理学与治疗学. 2015(02)
[6]细胞色素P450CYP3A65斑马鱼模型建立及对环境污染物的生物响应[J]. 李春杰,赵建,张世勇,潘微彤,蒲韵竹,贾启燕,查晓丹,尚艳楠,黄春倩,刘艳琴,钟玉绪,李前,丁日高,付爱玲,赵宝全. 中国药理学与毒理学杂志. 2014(06)
[7]斑马鱼在再生医学研究中的应用及进展[J]. 严丽锋,顾爱华. 遗传. 2013(07)
[8]斑马鱼胚胎和肿瘤细胞评价细胞毒药物活性比较研究[J]. 张红翠,王晓伟,徐晓敏,鲁疆,安晓晶,许波,马成俊,张红,王振华. 现代生物医学进展. 2012(27)
[9]斑马鱼模型在药物筛选中的应用[J]. 辛胜昌,赵艳秋,李松,林硕,仲寒冰. 遗传. 2012(09)
[10]斑马鱼在药物代谢中的研究进展[J]. 陈秋霞,曾苏. 药学学报. 2011(09)
本文编号：3607573
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