五个结核分枝杆菌分泌蛋白对宿主巨噬细胞免疫功能的调控影响研究

发布时间：2022-01-26 12:11

　　肺泡巨噬细胞是结核分枝杆菌侵入宿主后的第一生存环境。进入宿主巨噬细胞后,结核分枝杆菌能通过各种机制逃避宿主的免疫监视和清除作用。分泌蛋白作为重要毒力因子能够与宿主的某些组分相互作用,帮助病原菌在宿主细胞内居留、繁殖和扩散。但是,目前已知的在结核分枝杆菌侵染巨噬细胞过程中发挥作用的分泌蛋白数量非常有限,相关调控机制也有待阐明。本研究以卡介苗（BCG）菌株-牛巨噬细胞（BoMac）相互作用为模型,筛选和初步发现了3个新分泌蛋白（Rv0671,Rv0817,Rv1813）,并对它们的调控作用进行了探讨,主要取得了以下结果:（1）在实验室前期大规模筛选的基础上,进一步构建了17个超表达结核分枝杆菌潜在分泌蛋白的BCG重组菌株,并逐一完成了牛巨噬细胞（BoMac）的侵染实验;（2）利用RNA-seq技术对所有这些细菌侵染的BoMac中基因转录变化进行检测,并系统比较分析了它们对细胞凋亡信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路、氧化磷酸化过程、细胞因子与受体互作等的调控效应,筛选出了Rv0671,Rv0817,Rv1813,Rv3310和Rv3841等5个分泌蛋白明显影响宿主巨噬细胞免疫功能;... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：95 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

结核分枝杆菌中SecA1、SecA2和Tat蛋白分泌系统示意图(Majlessietal2015)

也被称为 T7S 系统 (Abdallah et al 2007; Bitter et al 2009) 。基因组研究发现结核分枝杆菌有 5 种 ESX / T7S 系统，涉及细菌的生理过程和宿主与病原体的相互作用。图1.3列出了结核分枝杆菌中5种ESX系统的遗传信息 (Majlessi et al 2015) 。ESX-1 系统对结核分枝杆菌毒力的影响已被广泛报道，但 ESX-1 系统相关的细菌干扰宿主细胞机制尚不明确。结核分枝杆菌 ESX-1 有关致病机制涉及一些存在相互影

五个结核分枝杆菌分泌蛋白对宿主巨噬细胞免疫功能的调控影响研究表达分泌蛋白的 BCG 重组菌株的构建验旨在研究表 3.1 中候选分泌蛋白基因在 BCG 超表达重组菌巨噬细胞（BoMac）免疫功能的影响。为此，首先要构建这组菌株。通过基因克隆和测序验证，我们得到了这些基因的并且将超表达载体电转入 BCG 野生型菌株感受态中，得到对菌株。随后抽提重组菌株的穿梭质粒，再次转化入 DH5α感质粒作为模版进行 PCR 验证后 ( 如图 3.1 ) ，最终得到转61 超表达载体的 BCG 重组菌株和 pMV261 超表达原始质粒实验。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Tyrosine phosphorylation and bacterial virulence[J]. Sarah E Whitmore,Richard J Lamont.  International Journal of Oral Science. 2012(01)



本文编号：3610469