结肠炎癌转化小鼠模型的数据分析及LEF1/TCFs成员在其中的作用机制研究
发布时间：2022-02-11 18:49
炎症性肠病（IBD）作为一种反复发作的慢性炎症,是结直肠癌发生的重要高危因素之一。炎癌转化是一个涉及到许多通路、分子的复杂过程,目前确切的机制研究不多。本研究首先建立了结肠炎相关结肠癌的小鼠模型,获得了炎癌转化小鼠模型的基因表达谱数据,并对其进行了分析和挖掘;此外,用生物信息学的方法探讨了可能参与结肠炎癌转化的肠道干细胞及其微环境相关基因；最后,重点探讨了LEF1/TCFs家族成员在结肠炎相关的结肠癌发生中的不同作用及其可能的机制。（第一部分）AOM-DSS小鼠模型是目前研究结肠炎相关结肠癌的一个重要模型,但是对此模型的分子机制研究不多。我们通过建立小鼠模型,进行了全基因组表达谱芯片实验。通过对不同组的表达谱数据进行比较分析,包括肿瘤组织VS正常组织（AD3VSCon）、肿瘤组织VS瘤旁组织（AD3VSAD3N）、炎癌转化晚期VS早期（AD3VSAD2）、腺癌VS腺瘤（AD4VSAD3）,我们发现在小鼠结肠炎癌转...
【文章来源】：北京协和医学院北京市211工程院校985工程院校
【文章页数】：223 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１．?ＡＯＭ－ＤＳＳ小鼠模型的建立??
６．小鼠结肠全基因组表达谱巧片实验??使用的试剂盆为?Ｗｈｏｌｅ?Ｍｏｕｓｅ?Ｇｅｎｏｍｅ?Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ?Ｋｉｔ，?４?Ｘ４４Ｋ?（Ａｇｉｌｅｎｔ，??Ｇ４１２２Ｆ）。??（１）取?ＲＮＡｌＯＯｎｇ，使其体积为?２．５ｕｌ，与?２ｕｌｓｐｉｋ：ｅ３?和?０．８ｕｌＴ７ｐｒｉｍｅｒ＇混合，总体??积为５．３ｕｌ，?６５。仁水浴ｌＯｍｉｎ，置于冰上不少于５ｍｉｎ；??（２）每管中分别加入?２ｕｌ?５ＸＦＳ?ｂｕ带ｒ，ｌｕｌ?０．１Ｍ?的?ＤＴＴ，０．５ｕｌ?ｄＮＴＰｓ?和?１．２ｕｌ??Ａ街ｓｃｒｉｐｔ，共４．７ｕｌ，使管中总、体积为ｌＯｕｌ，?４０°Ｃ水洛２ｈｒ，?７０°Ｃ水裕１５ｍｉｎ；??（３）避光标记，分别加入民Ｎａｓｅ－ｆｒｅｅｗａｔｅｒ０．：７５ｕｌ，５ＸＴＢ３？２ｕｌ，ＤＴＴ０．６ｕＩ，ＮＴＰｓ??ｌｕｌ，?Ｔ７ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ?０．２１?ｕｌ?和?Ｃｙ３?０．２４ｕｌ，共?６ｕｌ，４°Ｃ水洛?２ｈｒ，置于冰上不少于?５ｍｉｎ；??（４）分别加入ＲＮａｓｅ－斤ｅｅ?ｗａｔｅｒ?８４ｕｌ，?ＲＬＴ３５０ｕｌ，无水乙醇２５０ｕｌ，使终体积为７００ｕｌ，??上柱，４Ｔ：离也，１３０００ｒｐｍＸ３０ｓｅｃ；丟弃收集管，将柱子置于新的收集管中，加入??ＲＰＥ５００Ｕ１，４１：离也，１３０００ｒｐｍＸｌｍｉｎ；弃滤液，４Ｘ：空转，１３０００ｒｐｍＸ３０ｓｅｃ；弃??收集管，将柱子置于１．５ｍｌＥｐ管中，加入３０ｕｌ?ＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅ?ｗａｔｅｒ，?４°Ｃ离必，１３０００ｒｐｍ??Ｘ３０？６０ｓｅｃ，收集ｃＲＮＡ，定量；??（５）取１．６５ｕｇｃＲＮＡ，加入相应体积的ＲＮａｓｅ－ｆｔｅｅ?ｗａｔｅｒ，使体积为４１．８ｕｌ；分别
中均未见明思异常（表１－１）。ＨＥ染色的病理诊断巧果显示，小鼠结肠从ＡＤ１期的??急性炎痛恢复期发展为ＡＤ２期的轻度不典型增生巧，再发展到ＡＤ３的中、重度不??典型增生或腺瘤阶段（图１－３）。这一系列序贯的改变，与人类结肠炎相关结肠癌发??生的生理病理过程类似。因此，ＡＯＭ－ＤＳＳ模型能有效模巧人的结版炎相关结肠癌??的发病过程。???表１－１．?ＡＯＭ－ＤＳＳ模型中各组小鼠的造模结果分析???组别?数目?死ｆ：率（％）?成烟率（％）?病理诊断??．??Ｃｏｎ?（ＮａｉＶｅ）组?８?０?０?正常??ＡＯＭｏｎｌｙ?组?５?０?０?正常??ＤＳＳｏｎｌｙ组?８?１２．５（１巧）?０?慢性炎症??ＡＤ３组?２０?１５。。０）?９４．１２?（腦７）?中、重度不典型増生或腺瘤??Ｈｍ￣??職哪■??图１－３．各组ＨＥ染色结果??２１??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Pathogenesis of Crohn’s disease: Bug or no bug[J]. Marta Maia Bosca-Watts,Joan Tosca,Rosario Anton,Maria Mora,Miguel Minguez,Francisco Mora. World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology. 2015(01)
[2]MicroRNAs as novel predictive biomarkers and therapeutic targets in colorectal cancer[J]. Verena Stiegelbauer,Samantha Perakis,Alexander Deutsch,Hui Ling,Armin Gerger,Martin Pichler. World Journal of Gastroenterology. 2014(33)
[3]Role of microRNAs in the immune system,inflammation and cancer[J]. Jennifer Raisch,Arlette Darfeuille-Michaud,Hang Thi Thu Nguyen. World Journal of Gastroenterology. 2013(20)
本文编号：3620777
【文章来源】：北京协和医学院北京市211工程院校985工程院校
【文章页数】：223 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１．?ＡＯＭ－ＤＳＳ小鼠模型的建立??
６．小鼠结肠全基因组表达谱巧片实验??使用的试剂盆为?Ｗｈｏｌｅ?Ｍｏｕｓｅ?Ｇｅｎｏｍｅ?Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ?Ｋｉｔ，?４?Ｘ４４Ｋ?（Ａｇｉｌｅｎｔ，??Ｇ４１２２Ｆ）。??（１）取?ＲＮＡｌＯＯｎｇ，使其体积为?２．５ｕｌ，与?２ｕｌｓｐｉｋ：ｅ３?和?０．８ｕｌＴ７ｐｒｉｍｅｒ＇混合，总体??积为５．３ｕｌ，?６５。仁水浴ｌＯｍｉｎ，置于冰上不少于５ｍｉｎ；??（２）每管中分别加入?２ｕｌ?５ＸＦＳ?ｂｕ带ｒ，ｌｕｌ?０．１Ｍ?的?ＤＴＴ，０．５ｕｌ?ｄＮＴＰｓ?和?１．２ｕｌ??Ａ街ｓｃｒｉｐｔ，共４．７ｕｌ，使管中总、体积为ｌＯｕｌ，?４０°Ｃ水洛２ｈｒ，?７０°Ｃ水裕１５ｍｉｎ；??（３）避光标记，分别加入民Ｎａｓｅ－ｆｒｅｅｗａｔｅｒ０．：７５ｕｌ，５ＸＴＢ３？２ｕｌ，ＤＴＴ０．６ｕＩ，ＮＴＰｓ??ｌｕｌ，?Ｔ７ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ?０．２１?ｕｌ?和?Ｃｙ３?０．２４ｕｌ，共?６ｕｌ，４°Ｃ水洛?２ｈｒ，置于冰上不少于?５ｍｉｎ；??（４）分别加入ＲＮａｓｅ－斤ｅｅ?ｗａｔｅｒ?８４ｕｌ，?ＲＬＴ３５０ｕｌ，无水乙醇２５０ｕｌ，使终体积为７００ｕｌ，??上柱，４Ｔ：离也，１３０００ｒｐｍＸ３０ｓｅｃ；丟弃收集管，将柱子置于新的收集管中，加入??ＲＰＥ５００Ｕ１，４１：离也，１３０００ｒｐｍＸｌｍｉｎ；弃滤液，４Ｘ：空转，１３０００ｒｐｍＸ３０ｓｅｃ；弃??收集管，将柱子置于１．５ｍｌＥｐ管中，加入３０ｕｌ?ＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅ?ｗａｔｅｒ，?４°Ｃ离必，１３０００ｒｐｍ??Ｘ３０？６０ｓｅｃ，收集ｃＲＮＡ，定量；??（５）取１．６５ｕｇｃＲＮＡ，加入相应体积的ＲＮａｓｅ－ｆｔｅｅ?ｗａｔｅｒ，使体积为４１．８ｕｌ；分别
中均未见明思异常（表１－１）。ＨＥ染色的病理诊断巧果显示，小鼠结肠从ＡＤ１期的??急性炎痛恢复期发展为ＡＤ２期的轻度不典型增生巧，再发展到ＡＤ３的中、重度不??典型增生或腺瘤阶段（图１－３）。这一系列序贯的改变，与人类结肠炎相关结肠癌发??生的生理病理过程类似。因此，ＡＯＭ－ＤＳＳ模型能有效模巧人的结版炎相关结肠癌??的发病过程。???表１－１．?ＡＯＭ－ＤＳＳ模型中各组小鼠的造模结果分析???组别?数目?死ｆ：率（％）?成烟率（％）?病理诊断??．??Ｃｏｎ?（ＮａｉＶｅ）组?８?０?０?正常??ＡＯＭｏｎｌｙ?组?５?０?０?正常??ＤＳＳｏｎｌｙ组?８?１２．５（１巧）?０?慢性炎症??ＡＤ３组?２０?１５。。０）?９４．１２?（腦７）?中、重度不典型増生或腺瘤??Ｈｍ￣??職哪■??图１－３．各组ＨＥ染色结果??２１??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Pathogenesis of Crohn’s disease: Bug or no bug[J]. Marta Maia Bosca-Watts,Joan Tosca,Rosario Anton,Maria Mora,Miguel Minguez,Francisco Mora. World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology. 2015(01)
[2]MicroRNAs as novel predictive biomarkers and therapeutic targets in colorectal cancer[J]. Verena Stiegelbauer,Samantha Perakis,Alexander Deutsch,Hui Ling,Armin Gerger,Martin Pichler. World Journal of Gastroenterology. 2014(33)
[3]Role of microRNAs in the immune system,inflammation and cancer[J]. Jennifer Raisch,Arlette Darfeuille-Michaud,Hang Thi Thu Nguyen. World Journal of Gastroenterology. 2013(20)
本文编号：3620777
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