基于密度梯度法分离纯化的改良培养新生小鼠心肌细胞方法研究

发布时间：2022-02-22 22:27

　　目的基于Percoll不连续密度梯度法分离纯化心肌细胞,建立一个快速稳定提取新生小鼠心肌细胞的原代培养方法。方法在无菌状态下取C57BL/6乳鼠心室,用低浓度Ⅱ型胶原酶消化,通过调整温度、消化方式、离心时间及转速,采用Percoll密度梯度法分离纯化心肌细胞。观察不同时间心肌细胞形态;用0.4%台盼蓝染色检测细胞存活率及细胞数量;采用免疫荧光染色法检测心肌肌钙蛋白I（cTnI）表达情况,鉴定心肌细胞及其纯度。结果 5次培养结果显示,心肌细胞的平均存活率为（93.12±0.75）%,纯度为（96.36±0.60）%,细胞生长状态良好,可以贴壁自发搏动。结论采用本方法能获得产量、存活率及纯度很高的新生小鼠原代心肌细胞,耗时较短,是一种理想的分离纯化原代心肌细胞的方法,可满足后续各种实验要求。 

【文章来源】：内科. 2020,15(02)

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要设备和器材
    1.2 方法
        1.2.1 新生小鼠心肌组织的提取、分离、培养
        1.2.2 Percoll不连续密度梯度法纯化新生小鼠心肌细胞
    1.3 细胞存活率及数量检测
    1.4 心肌细胞类型和形态学观察
    1.5 心肌细胞免疫荧光鉴定及纯度分析
    1.6 统计学处理
2 结 果
    2.1 心肌细胞数量及存活率
    2.2 心肌细胞搏动类型、形态学观察、搏动频率
    2.3 新生小鼠原代心肌细胞鉴定及纯度
3 讨 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]改良的乳小鼠心肌细胞原代培养方法[J]. 吴丹,冯健,莫显刚,刘应才.  中国比较医学杂志. 2016(04)
[2]小鼠乳鼠原代心肌细胞的改良培养[J]. 孟琳琳,黄莺,马依彤,刘芬,陈邦党,陈小翠,盖敏涛.  中国组织工程研究. 2015(37)
[3]新生小鼠心脏细胞体外共培养体系的建立及其在心肌细胞增殖研究中的应用[J]. 胡金莲,郑怡文,谷晓蕾,陆国才.  北京医学. 2015(05)



本文编号：3640306