Netrin-1通过受体A2BAR在真菌性角膜炎中发挥抑炎作用的研究

发布时间：2022-02-24 12:46

　　目的:研究神经轴突导向因子Netrin-1对烟曲霉菌（Aspergillus fumigatus,A.fumigatus）感染的真菌性角膜炎发病机制的作用及对角膜上皮细胞增殖和迁移的影响。方法:1、烟曲霉菌感染C57BL/6小鼠角膜,建立小鼠真菌性角膜炎动物模型,用PCR法、Western blot法及免疫荧光法检测小鼠正常角膜和感染后1天、3天、5天角膜中Netrin-1 mRNA和蛋白的表达;用PCR法检测小鼠正常角膜和感染后1天、3天、5天角膜中Netrin-1受体A2BAR mRNA的表达。2、重组蛋白Netrin-1预处理后建立小鼠真菌性角膜炎动物模型,观察小鼠角膜感染后临床评分;用PCR法和Western blot法检测Netrin-1预处理前后感染角膜中IL-1β、TNF-α、IL-10 mRNA和蛋白的表达;采用免疫荧光法及MPO法检测Netrin-1预处理前后感染角膜中中性粒细胞的数量变化。3、烟曲霉菌刺激RAW264.7细胞,PCR法、Western blot法检测正常细胞及烟曲霉菌刺激后4小时、8小时、12小时细胞中Netrin-1 mRNA和蛋白的表达;PCR法... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abtract
引言
材料与方法
    1 实验材料
        1.1 实验对象
        1.2 实验主要试剂和耗材
        1.3 实验主要仪器和设备
    2 实验方法
        2.1 烟曲霉菌培养及菌丝抗原刺激液的制备
        2.2 小鼠真菌性角膜炎模型的建立
        2.3 小鼠角膜预处理实验
        2.4 RAW264.7 细胞的培养和烟曲霉菌菌丝刺激实验
        2.5 RAW264.7 细胞预处理实验
        2.6 Real-time RT-PCR实验方法
        2.7 Western blot实验方法
        2.8 免疫荧光染色实验方法
        2.9 比色法检测小鼠角膜中性粒细胞髓过氧化物酶(MPO)
        2.10 CCK-8 细胞增殖检测
        2.11 细胞划痕试验
    3 统计学处理
结果
    1 C57BL/6 小鼠真菌性角膜炎中Netrin-1 及其受体A2BAR的表达
    2 重组Netrin-1 对感染烟曲霉菌的C57BL/6 小鼠角膜炎症的影响
    3 Netrin-1 抑制烟曲霉菌刺激的RAW264.7 细胞的炎症反应
    4 Netrin-1 通过其受体A2BAR在C57BL/6小鼠和RAW 264.7细胞中发挥抑炎作用
    5 Netrin-1 促进HCECs增殖和迁移
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
附录
致谢



本文编号：3642753