鹦鹉热衣原体SINC蛋白通过MAPK/ERK信号通路调控宿主细胞自噬和凋亡

发布时间：2022-02-26 08:52

　　目的:探讨鹦鹉热衣原体（Chlamydia psittaci,Cps）T3SS分泌蛋白SINC与宿主细胞自噬和凋亡的关系以及MAPK/ERK信号通路在其中的调控作用,有助于进一步阐明Cps致病机制。方法:构建pET-30a（+）/SINC重组质粒,并转化E.coli BL21菌株,0.1mM IPTG诱导表达并纯化获得SINC蛋白。BCA法测定SINC重组蛋白浓度,并经多粘菌素B去内毒素处理。western blot检测不同浓度（2、4、6、8、10μg/ml）的SINC刺激HeLa细胞和RAW 264.7细胞24h和最佳浓度SINC刺激两种细胞不同时间（0、6、12、24、36h）后自噬蛋白LC3-II、Becin-1、Bax和Bcl-2的水平,并用间接免疫荧光法检测SINC蛋白刺激两种细胞后LC3的水平,透射电镜检测自噬特殊结构,Hoechst33258染色检测细胞凋亡率。用最佳浓度SINC刺激两种细胞不同时间（0、5、15、30、60、120min或者0、6、12、18、24、36h）后,western blot检测ERK1/2的磷酸化;用50μM ERK1/2抑制剂U0126预... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
主要中英文缩写
第1章 绪论
第2章 实验材料
    2.1 主要仪器和设备
    2.2 载体、菌株及细胞株
    2.3 主要试剂盒
    2.4 主要实验试剂
    2.5 其他
第3章 实验方法
    3.1 pET-30a(+)/SINC原核表达载体的构建及鉴定
    3.2 重组SINC蛋白的制备
    3.3 SINC蛋白与细胞自噬的关系
    3.4 MAPK/ERK信号通路对SINC蛋白介导细胞自噬的影响
    3.5 SINC蛋白与细胞凋亡的关系
    3.6 MAPK/ERK信号通路对SINC蛋白介导细胞凋亡的影响
    3.7 统计学处理
第4章 实验结果
    4.1 SINC的 PCR扩增
    4.2 重组质粒的构建及鉴定
    4.3 SINC蛋白的表达及纯化
    4.4 SINC蛋白与细胞自噬的关系
    4.5 MAPK/ERK信号通路对SINC蛋白介导细胞自噬的影响
    4.6 SINC蛋白与细胞凋亡的关系
    4.7 MAPK/ERK信号通路对SINC蛋白介导细胞凋亡的影响
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
附录
综述
    参考文献
科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Occurrence of Chlamydia spp.in wild birds in Thailand[J]. Suksai Parut,Onket Rattanaporn,Wiriyarat Witthawat,Sangkachai Nareerat,Lekcharoen Paisin,Sariya Ladawan.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2019(02)
[2]自噬在沙眼衣原体持续感染中的可能作用[J]. 邵丽丽,郭媛丽,刘全忠.  中国皮肤性病学杂志. 2016(12)
[3]内质网应激与白癜风[J]. 梅奕洁,孙乐栋.  中国皮肤性病学杂志. 2015(10)
[4]MAPK/ERK信号通路参与沙眼衣原体抑制TNF-α诱导的细胞凋亡[J]. 杜昆,李琦,周名,潘晖.  中国皮肤性病学杂志. 2014(05)

硕士论文
[1]JAK/STAT3信号通路在鹦鹉热嗜衣原体抑制细胞凋亡中的作用[D]. 孙源彬.南华大学 2016
[2]沙眼衣原体pORF5质粒蛋白对HeLa细胞自噬与凋亡的影响[D]. 杨晓玉.南华大学 2015



本文编号：3644338