芒果过敏小鼠模型的建立及新主要过敏原几丁质酶的鉴定

发布时间：2022-08-08 17:05

　　背景:随着过去十几年社会工业化的进程,过敏性疾病的发生率也呈现出了上升的趋势。芒果是一种重要的水果过敏原,食用、接触芒果及其深加工产品都可能使过敏患者产生皮炎、口腔过敏综合征、哮喘等严重的过敏反应。截止目前,大多数相关的研究文献还只是限于对病例的报道、病人血清IgE与芒果粗提蛋白的反应性及交叉过敏的探究上,对芒果果实中蛋白质类过敏原及其致敏机制的了解还十分匮乏。开展相关的研究工作,将为芒果过敏的精确诊断与治疗提供依据。目的:（1）通过建立小鼠模型,探究芒果的致敏机制;（2）鉴定新的芒果过敏原,并对其免疫原性、抗原表位及分子结构特征进行探究。方法:1)芒果致敏Balb/c小鼠过敏性气道炎症模型的建立将12只6-8周龄雌性Balb/c小鼠随机分为两组,模型组:在第0、3、7天腹腔注射150μl包含20μg芒果果实粗提蛋白（MCEP）+2 mg明矾佐剂的生理盐水致敏,在第14、16、18、20天滴鼻50μg MCEP（20μl）进行激发,对照组以相同体积的生理盐水代替MCEP,第21天时处理小鼠。收集小鼠血清、肺泡灌洗液（BALF）以及脾细胞培养上清,检测特异性抗体（IgE、IgG1）、细胞... 

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 芒果过敏研究综述
    1.1 引言
    1.2 芒果过敏反应类型
        1.2.1 速发型过敏反应
        1.2.2 迟发型过敏反应
    1.3 过敏原类型
        1.3.1 非蛋白质类过敏原
        1.3.2 蛋白质类过敏原
    1.4 交叉反应
    1.5 讨论
第2章 芒果致敏Balb/c小鼠过敏性气道炎症模型的建立
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 主要试剂及耗材
        2.2.2 主要试验设备
        2.2.3 主要溶液配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 BCA法定量蛋白
        2.3.2 芒果果实粗提蛋白(MCEP)的制备及SDS-PAGE电泳
        2.3.3 动物模型建立
        2.3.4 间接ELISA测定血清中特异性IgE、IgG1、IgG2a
        2.3.5 WesternBlot分析血清中的MCEP特异性IgE、IgG1
        2.3.6 小鼠脾细胞体外培养及细胞因子检测
        2.3.7 肺泡灌洗液及细胞甩片
        2.3.8 肺组织包埋及H&E、PAS染色
        2.3.9 肺组织炎症评分及支气管粘液分泌评分
        2.3.10 数据分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 芒果果实总蛋白SDS-PAGE分析
        2.4.2 血清中特异性抗体及mMCP-
        2.4.3 脾细胞培养上清中细胞因子的表达
        2.4.4 肺泡灌洗液中细胞因子的表达
        2.4.5 Westernblot分析血清中特异性抗体
        2.4.6 肺泡灌洗液细胞分类、计数
        2.4.7 H&E及PAS染色分析
    2.5 讨论
第3章 芒果新主要过敏原几丁质酶的克隆表达及免疫学鉴定
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 主要试剂及耗材
        3.2.2 主要试验设备
        3.2.3 芒果过敏患者血清
        3.2.4 主要溶液配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 芒果果实粗提蛋白的制备及SDS-PAGE电泳
        3.3.2 Dotblot及westernblot
        3.3.3 shotgun质谱鉴定
        3.3.4 基因合成及质粒构建
        3.3.5 感受态细胞制备
        3.3.6 质粒转化
        3.3.7 重组蛋白诱导表达
        3.3.8 带His标签蛋白纯化
        3.3.9 包涵体蛋白复性
        3.3.10 DEAE弱阴离子柱纯化蛋白步骤
        3.3.11 重组芒果几丁质酶免疫学鉴定
        3.3.12 生物信息学分析
        3.3.13 线性IgE结合表位预测及鉴定
    3.4 结果分析
        3.4.1 芒果果实粗提蛋白SDS-PAGE电泳及westernblot分析
        3.4.2 shotgun结果
        3.4.3 几丁质酶基因合成及质粒构建
        3.4.4 重组蛋白诱导表达
        3.4.5 蛋白纯化
        3.4.6 重组芒果几丁质酶免疫学鉴定
        3.4.7 芒果几丁质酶生物信息学分析及线性IgE结合表位鉴定
    3.5 讨论
参考文献
英文缩略词表
致谢
攻读硕士学位期间的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
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[9]食用芒果致眼部病变1例[J]. 张小娟,郝琼,朱静,徐峰.  临床眼科杂志. 2011(05)
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本文编号：3671897