miR-29a对TLR4/MyD88信号通路调节作用的研究

发布时间：2022-09-30 15:25

　　目的:结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）是导致结核病（Tuberculosis,TB）的病原菌,其感染后主要寄生于巨噬细胞中。巨噬细胞是先天性免疫系统中的一员,细胞膜表面、胞内器室膜上存在模式识别受体（pattern recognition receptor,PRR）可以识别病原菌,PRR识别病原菌后,通过蛋白间的级联反应,激活与免疫应答相关的信号通路,产生细胞因子,进一步激活适应性免疫应答,使机体形成一个完善的免疫应答网络,从而更有效的消灭病原菌。本实验主要研究卡介苗（Bacillus Calmette-Guerin Vaccine,BCG）感染RAW264.7细胞后,microRNA-29a（miR-29a）对其激活的Toll样受体4/髓样分化因子88（Toll-like receptor 4/Myeloid differentiation factor88,TLR4/MyD88）信号通路是否具有调控作用,为结核杆菌的致病机理或药物靶标的发掘提供实验依据。方法:设置六个实验组,分别是空白对照组、miR-29a抑制载体转染组、空载转染组、BC... 

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
前言
第一篇 文献综述
    第一章 微小RNA对巨噬细胞发育和功能调节的研究进展
        1.1 microRNAs对免疫细胞发育的调节
        1.2 microRNAs对巨噬细胞极化的调节
        1.3 miRNAs对巨噬细胞功能的调节
            1.3.1 炎症反应
            1.3.2 抗原呈递
            1.3.3 吞噬功能
            1.3.4 呼吸爆发
            1.3.5 巨噬细胞自噬
        1.4 miRNAs对巨噬细胞凋亡的调节
        1.5 microRNAs与巨噬细胞相关疾病
        1.6 结语
    第二章 Toll样受体及mi RNAs对其相关疾病调节作用的研究进展
        2.1 TLRs的功能及其在疾病中的作用
        2.2 miRNAs与 TLRs相关疾病
            2.2.1 miRNAs与 TLRs受体相关感染性疾病
            2.2.2 miRNAs与 TLRs受体相关炎症性疾病
            2.2.3 miRNAs与 TLRs受体相关系统性红斑狼疮
            2.2.4 miRNAs与 TLRs受体相关肿瘤
        2.3 结语
第二篇 研究内容
    第一章 miR-29a对巨噬细胞TLR4/My D88 信号通路相关基因mRNA水平调节作用的研究
        1.1 材料
            1.1.1 细胞株、质粒和菌种
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要仪器
            1.1.4 溶液配制
        1.2 方法
            1.2.1 卡介苗的培养及验证
            1.2.2 质粒提取及验证
            1.2.3 细胞培养
            1.2.4 细胞感染实验
            1.2.5 细胞转染实验
            1.2.6 细胞RNA提取
            1.2.7 miRNA反转录及荧光定量PCR
            1.2.8 mRNA反转录及荧光定量PCR
            1.2.9 数据处理
        1.3 结果
            1.3.1 BCG的培养及验证
            1.3.2 抑制载体电泳结果
            1.3.3 荧光定量PCR引物验证结果
            1.3.4 结核分枝杆菌感染巨噬细胞结果
            1.3.5 六个实验组TLR4/My D88 信号通路基因的表达情况
            1.3.6 六个实验组中mi R-29a的表达情况
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第二章 miR-29a对巨噬细胞TLR4/MyD88 信号通路相关蛋白表达水平调节作用的研究
        2.1 材料
            2.1.1 细胞株、质粒和菌种
            2.1.2 主要试剂及材料
            2.1.3 主要仪器
            2.1.4 主要溶液配制
        2.2 方法
            2.2.1 卡介苗的培养及验证
            2.2.2 质粒提取及验证
            2.2.3 细胞培养
            2.2.4 细胞感染实验
            2.2.5 细胞转染实验
            2.2.6 细胞总蛋白提取
            2.2.7 BCA蛋白定量
            2.2.8 一氧化氮浓度测定(根据说明书操作)
            2.2.9 ELISA(双抗体夹心法)
            2.2.10 Western Blot
        2.3 结果与分析
            2.3.1 蛋白质BCA定量
            2.3.2 一氧化氮浓度检测
            2.3.3 细胞因子的检测
            2.3.4 Western Blot检测通路关键基因
        2.4 讨论
        2.5 小结
结论
参考文献
附录
作者简介
致谢



本文编号：3683800