突触黏附分子NECL4对大脑皮质Ca 2+ -CaMKII-CDC42信号通路的影响

发布时间：2022-10-09 14:51

　　目的探究突触黏附分子NECL4对Ca²⁺-CaMKII-CDC42信号通路和树突棘数量的影响。方法以Necl4全身性敲除小鼠为研究对象,对8周龄的Necl4野生（WT）及敲除（KO）小鼠脑组织进行高尔基染色,对大脑皮质第Ⅱ/Ⅲ层椎体神经元二级树突上树突棘密度进行统计。通过Western blot和RT-qPCR实验对Ca²⁺-CaMKII信号通路及其下游信号分子的蛋白和mRNA表达水平进行检测,包括CDC42、Rac1、RhoA、H-Ras、ERK等信号蛋白。结果高尔基染色结果显示,Necl4敲除小鼠大脑皮质第Ⅱ/Ⅲ层椎体神经元二级树突上树突棘数量与野生型小鼠相比减少（P＜0.01）。Western blot实验结果显示CaMKIIα（P＜0.05）及phospho-CaMKIIα（Thr286）（P＜0.05）在Necl4敲除小鼠中表达降低,CaMKIIα的下游信号分子CDC42的mRNA水平（P＜0.05）和蛋白水平（P＜0.05）在Necl4敲除小鼠中均表达降低。结论 NECL4通过Ca²⁺-CaMKII-CDC4... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物:
        1.1.2 主要试剂:
    1.2 方法
        1.2.1 Golgi-Cox染色及树突棘密度的数量统计:
        1.2.2 Western blot检测蛋白表达:
        1.2.3 实时荧光定量PCR检测mRNA水平:
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 高尔基染色显示Necl4敲除后二级树突上树突棘数量减少
    2.2 Necl4敲除后CaMKIIα及phospho-CaMKIIα蛋白在大脑皮质表达下降
    2.3 Necl4敲除后CDC42在大脑皮质的表达下降
    2.4 Rac1、H-Ras、RhoA 3种小GTPase蛋白的mRNA水平在Necl4敲除后有下降的趋势
    2.5 ERK及phospho-ERK在Necl4敲除后有升高的趋势
3 讨论



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