肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）单克隆抗体制备及检测方法的建立

发布时间：2022-10-17 15:52

　　该文通过制备出特异性高的单克隆抗体,初步建立了双抗夹心ELISA定量测定CK-MB的方法,为CK-MB试剂和原料的国产化奠定重要的基础。以购入的CK-MB抗原为免疫原,对随机选取的5只6～8周龄Balb/c健康雌性小鼠进行免疫。采用有限稀释法、间接ELISA、捕获ELISA方法,最终筛选出了3株能够稳定分泌抗体的细胞株,分别命名为2F6、2H3和2H9,其分泌的单克隆抗体亚型均为IgG3,腹水效价分别为1:102000、1:51200和1:102000。采用亲和层析法对3株杂交瘤细胞产生的小鼠腹水进行纯化,分光光度计测定纯化后的单克隆抗体2H3、2F6、2H9的浓度分别为5 mg/mL、6 mg/mL、6 mg/mL, SDS-PAGE结果表明,成功纯化了小鼠腹水,能够清晰地观察到轻链和重链两条带。Western blot结果表明,单克隆抗体2F6、2H3和2H9均能特异性识别CK-MB蛋白。间接ELISA及捕获ELISA方法检测显示,单克隆抗体2H3只与CK-MB及CK-BB发生捕获ELISA方法反应;单克隆抗体2H9只与CK-MB及CK-BB发生捕获ELISA方法反应;单克隆抗体2... 

【文章页数】：13 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 实验方法
        1.2.1 动物免疫及效价测定
        1.2.2 阳性杂交瘤细胞的筛选及克隆
        1.2.3 单克隆抗体腹水的制备、纯化
        1.2.4 单克隆抗体亚型的鉴定
        1.2.5 单克隆抗体亲和力测定
        1.2.6 细胞稳定性实验
        1.2.7 单克隆抗体的特异性鉴定
        1.2.8 CK-MB定量检测试剂的初步建立
2 结果与分析
    2.1 免疫小鼠血清效价检测结果
    2.2 杂交瘤细胞株的建立
    2.3 单抗腹水的产生及纯化
    2.4 单抗亚型的鉴定
    2.5 单抗亲和常数测定
    2.6 细胞稳定性实验
    2.7 单克隆抗体特异性检测
    2.8 CK-MB检测方法的建立
        2.8.1 捕获抗体最佳包被浓度和酶标抗体最佳稀释浓度的确定
        2.8.2 样品稀释缓冲液的选择
        2.8.3 酶标抗体作用时间的选择
        2.8.4 标准曲线的建立
        2.8.5 准确度实验
        2.8.6 精密度实验
        2.8.7 分析灵敏度实验
        2.8.8 分析特异性
        2.8.9 抗干扰性实验
        2.8.10 稳定性实验
        2.8.11 初步建立的定量检测试剂盒与同类产品的比较
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]基于N蛋白的PEDV间接ELISA检测方法的建立与初步应用[J]. 张琪,徐丽美,周宏超,杨猛超,张淼涛,于三科,许信刚.  中国兽医科学. 2018(02)
[2]CK-MB特异性单抗的制备方法及其应用[J]. 陈自敏,周国梁,徐伟玲,郑小红,童勋章,柯起沈,宋浏伟,葛胜祥.  生物工程学报. 2017(01)
[3]联合定量检测急性心肌梗死标志物在诊断中的价值[J]. 姚雯颖.  检验医学与临床. 2007(07)
[4]中华医学会检验学会文件心肌损伤标志物的应用准则[J]. 杨振华 ,潘柏申 ,许俊堂.  中华检验医学杂志. 2002(03)
[5]极性小分子抗原包被条件的摸索[J]. 沈月雷,邱平,王剑锋,戴斌,李德富.  细胞与分子免疫学杂志. 1997(01)

硕士论文
[1]人脑心肌炎病毒IgM捕获ELISA方法的建立及初步应用[D]. 王丹.西北民族大学 2014



本文编号：3692358