TNF-α激活RhoA/ROCK信号通路增加单核细胞增生性李斯特菌感染内皮细胞的通透性

发布时间：2022-10-20 12:33

　　目的探讨大鼠肉瘤同源基因A/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶（RhoA/ROCK）信号通路在肿瘤坏死因子α（TNF-α）促进单核细胞增生性李斯特（Lm）感染致内皮细胞通透性升高的调控作用。方法培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分为未感染细胞对照组、 TNF-α处理组（100 ng/mL TNF-α处理2 h）、 Lm感染组（以MOI=10的Lm感染2 h,加入庆大霉素杀菌0.5 h）、 TNF-α处理的Lm感染组（Lm感染组细胞加入100 ng/mL TNF-α处理2 h）、 Y-27632联合TNF-α处理的Lm感染组（细胞用50μmol/L ROCK抑制剂Y-27632处理30 min,再如上进行Lm感染和TNF-α刺激）。Western blot法检测HUVEC的RhoA、闭锁小带蛋白1（ZO-1）、闭合蛋白（occludin）、 ROCK蛋白水平,检测辣根过氧化物酶（HRP）渗漏量分析HUVEC通透性变化,用异硫氰酸荧光素（FITC）标记的鬼笔环肽染色检测纤维型肌动蛋白（F-actin）细胞骨架的改变。结果 TNF-α可降低Lm感染的内皮细胞紧密连接蛋白ZO-1、 occludin的... 

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 HUVEC培养和细菌培养
        1.2.2 HUVEC分组和处理
        1.2.3 Western blot法检测HUVEC的RhoA、 ROCK和ZO-1、 occludin蛋白表达
        1.2.4 HRP通透率实验检测HUVEC通透性
        1.2.5 FITC标记的鬼笔环肽检测HUVEC的细胞骨架分布
        1.2.6 统计学分析
2 结果
    2.1 TNF-α刺激Lm感染的HUVEC其ROCK、 RhoA蛋白表达增加, ZO-1、 occludin蛋白表达降低
    2.2 TNF-α刺激Lm感染的HUVEC通透性增强
    2.3 TNF-α刺激Lm感染的HUVEC的细胞骨架重排
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]脑脊液TNF-α、IL-6、NSE在小儿中枢神经系统感染中的诊断价值[J]. 世淑兰,杨艳飞,李荣杰,杨俊逸,冯星星,李小娟,周百灵,奎莉越,杜廷义.  国际检验医学杂志. 2018(12)
[2]TNF-α联合FLAIR序列对新生儿化脓性脑膜炎的诊断价值[J]. 张艳丽,孙晓琳,武军,孙爱荣.  中国妇幼健康研究. 2017(11)



本文编号：3694514