IFIT1负反馈上调干扰素β表达促进抗HSV-1病毒保护

发布时间：2022-10-30 20:14

　　Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSV-1）是危害人类健康的常见病原体之一,能够通过受损皮肤或黏膜感染宿主细胞并引起多种疾病。HSV-1的侵入激活先天免疫模式识别受体,诱导干扰素β（IFN-β）的产生,通过表达干扰素刺激基因（ISG）发挥抗病毒功能。近年来,干扰素诱导的四肽重复蛋白1（IFIT1）在病毒感染过程中的作用引起了广大研究者的关注。然而,其具体机制尚未完全清楚。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了小鼠成纤维细胞（L929） IFIT1敲除细胞株,免疫印迹方法检测敲除细胞株IFIT1在蛋白质水平的表达。转染HT-DNA和Poly[I:C]刺激L929 WT和IFIT1敲除细胞株,实时定量PCR技术检测发现,HT-DNA刺激敲除细胞时,IFN-β及下游ISGs的表达量显著升高。IFN-β的表达量比L929-WT组平均高出13. 4倍,IFIT1和趋化因子10 （CXC chemokine ligand-10,CXCL10）的表达量比L929 WT组分别平均高出6. 7倍和21倍（P＜0. 001）,而Poly[I:C]刺激无明显变化（P＞0. 05）,表明IFIT1是通过DNA信号通路来... 

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 试剂及仪器
    1.3 sgRNA的设计与合成
    1.4 IFIT1敲除质粒的构建
    1.5 敲除质粒的转染及敲除细胞株的筛选
    1.6 免疫印迹验证敲除细胞株在蛋白质水平的表达
    1.7 实时定量PCR检测IFN-β及ISG的表达量
    1.8 实时定量PCR测定HSV-1-VP26-mCherry病毒的拷贝数
    1.9 感染IFIT1敲除细胞株检测病毒的复制及增殖能力
    1.1 0 数据处理及统计学分析
2 结果
    2.1 CRISPR/Cas9-IFIT1基因敲除质粒及敲除细胞株的鉴定
    2.2 实时定量PCR检测IFIT1基因的缺失上调IFN-β及ISG的表达量
    2.3 HSV-1-VP26-mCherry病毒浓度测定
    2.4 IFIT1基因缺失抑制HSV-1病毒的增殖
    2.5 IFIT1基因缺失抑制HSV-1病毒的拷贝数
3 讨论



本文编号：3699411