小鼠肝炎病毒S蛋白稳定性与病毒适应性的关系及其表达机制的研究

发布时间：2022-11-05 17:49

　　冠状病毒（Coronavirus）是一类有包膜的、单股正链RNA病毒,它是目前已知基因组最大的RNA病毒,它可感染的宿主范围较广,包括人、鸟类及多种哺乳类动物,可引起上呼吸道、胃肠道、肝脏及中枢神经系统等疾病。由于2003年在我国局部地区爆发的严重急性呼吸道综合征（Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS-CoV）和2012年在中东地区爆发的中东呼吸道综合征病毒（Middle East Respiratory Syndrome）,MERS-CoV)引起人们对它的关注。冠状病毒的S蛋白（spike protein）是介导病毒进入宿主细胞的关键蛋白,本文主要从两个方面研究S蛋白对小鼠肝炎病毒（mouse hepatitis virus,MHV）A59生活周期的影响:第一、S蛋白的稳定性对病毒适应性的影响;第二、MHV是如何逃逸宿主细胞无义介导的RNA降解（nonsense-mediated mRNA decay,NMD）实现S蛋白表达的。包膜病毒通过病毒和细胞膜的融合进入细胞,这个过程是由病毒包膜蛋白和宿主受体之间的相互作用介导的。一般认为,小鼠肝炎病毒... 

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一部分
    第一章 前言
        1.1 PH对病毒与细胞膜融合的影响
        1.2 冠状病毒的简介
            1.2.1 冠状病毒的分类
            1.2.2 冠状病毒的生物学特征
            1.2.3 冠状病毒的危害
            1.2.4 小鼠肝炎病毒膜融合蛋白的概述
    第二章 材料与方法
        2.1.1 主要试剂及培养基
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 主要耗材
        2.1.4 菌株、质粒和细胞
        2.1.5 常用溶液的配方及配制
        2.1.6 细胞转染
        2.1.7 病毒生长曲线实验
        2.1.8 空斑法检测病毒滴度
        2.1.9 病毒竞争性抑制实验
        2.1.10 病毒热稳定性实验
        2.1.11 RNA提取
        2.1.12 纯化RNA模板后QPCR
        2.1.13 核质分离实验
        2.1.14 免疫共沉淀实验
        2.1.15 间接免疫荧光实验
        2.1.16 报告系统质粒构建
    第三章 H209对pH8.0诱导的非受体依赖的MHV-A59 S蛋白介导的膜融合形成的影响
        3.1 H209对于PH8.0介导的非受体依赖的合胞体的形成是重要的
        3.2 H209A突变的MHV A59病毒生长减慢
        3.3 H209A病毒增加了MHV A59 S蛋白的热稳定性
        3.4 讨论分析
        3.5 结论
        3.6 研究中的不足及进一步待解决的问题
    参考文献
第二部分
    第一章 前言
        1.1 病毒感染和细胞mRNA质量控制
            1.1.1 NMD通路
            1.1.2 NMD通路对病毒复制的影响及病毒的逃逸机制研究
            1.1.3 NMD通路对冠状病毒复制的影响
            1.1.4 结语
    第二章 结果与分析
        2.1 抑制NMD通路促进MHV的复制
        2.2 MHV A59感染抑制NMD通路
        2.3 MHV N蛋白与NMD通路蛋白UPF1和UPF3B具有RNA依赖的相互作用
        2.4 PTBP1保护MHV逃避NMD通路降解
        2.5 PTBP1的亚细胞定位在MHV感染时发生改变
        2.6 在NMD报告系统中PTBP1和N蛋白都可以抑制NMD通路
        2.7 讨论分析
    第三章 全文总结
        3.1 结论
        3.2 研究中的不足及进一步待解决的问题
    参考文献
致谢
个人简介及发表文章



本文编号：3703052