重组旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂体外诱导骨髓来源巨噬细胞极化的研究

发布时间：2022-12-09 23:03

　　目的探讨重组旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制（rTs-Cys）对体外诱导骨髓来源巨噬细胞（BMDMs）极化的调控作用。方法获取BMDMs并培养至条件培养基中,7d后获取成熟BMDMs。将此BMDMs分为阴性对照组（A组）、阳性对照组（B组）、单独重组蛋白组（C组）和蛋白共培养组（D组）,A组细胞给予10 ng/mLγ-干扰素（IFN-γ）和100 ng/mL脂多糖（LPS）刺激,B组细胞给予10 ng/mL白细胞介素（IL）-4和10 ng/mL IL-10刺激,C组细胞给予1_μg/mL rTs-Cys干预,D组细胞给予1_μg/mL rTs-Cys、10 ng/mL IFN-γ及100 ng/mL LPS刺激。干预24 h后,收集细胞及培养上清,采用流式细胞术检测各组细胞中F4/80⁺、CD11b⁺、CD206⁺和CD11c⁺细胞比例,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清中IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-10及转化生长因子-β（TGF... 

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【文章目录】：
材料与方法
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    2 方法
        2.1 rTs-Cys蛋白表达及鉴定
        2.2 BMDMs获取及培养
        2.3 BMDMs极化
        2.4 极化后巨噬细胞CD11c+、CD206+比例检测
        2.5 CD86+、CD206+蛋白表达检测
        2.6 细胞因子测定
    3 伦理学声明
    4统计学处理
结果
    1 rTs-Cys的的表表达达、纯化和鉴定
    2 rTs-Cys诱导MM2型巨噬细胞比例增加并抑制向MM1型极化
    3 rTs-Cys干预后BMDMs表型鉴定及极化形态
    4 极化后BMDMs分泌的细胞因子变化
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]源自日本血吸虫的半胱氨酸蛋白酶抑制剂对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的影响[J]. 褚亮,李徽徽,王书书,袁圆,姜辉,徐岚松,贺文欣,王守祥,赵木子,白永生,魏明,刘涛,盛洁,陈兴智,方强,杨小迪.  中国血吸虫病防治杂志. 2018(03)
[2]两种蠕虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对小鼠腹腔渗出细胞一氧化氮产生及细胞因子分泌的影响[J]. 杨小迪,李徽徽,陶志勇,方强,程洋,徐岚松,薛仁敏,陈勇,夏惠,张慧,姜辉,刘涛,彭琨,陈兴智.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2017(02)
[3]小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养及极化相关实验方法的建立[J]. 任凯夕,赵诣林,金超,韩骅.  细胞与分子免疫学杂志. 2013(03)
[4]旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因TsCystatin1的克隆及序列分析[J]. 姚菊霞,李文卉,盖文燕,曲自刚,谢志宙,王艳华,张德林,付宝权.  中国兽医科学. 2011(06)



本文编号：3715546