抗苗勒管激素免疫磁珠的制备及其初步应用

发布时间：2022-12-25 14:03

　　目的制备人的抗苗勒管激素（AMH）免疫磁珠及酶标抗体,初步建立一种基于纳米磁珠的双抗体夹心ELISA快速检测方法。方法构建人AMH重组蛋白表达载体,表达和纯化AMH重组蛋白,将获得的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。通过聚乙二醇将脾细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞融合,采用ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,体内腹水诱生法制备抗体,结合Western blot法评价单克隆抗体。利用蛋白A（Protein A）对抗体进行亲和层析纯化,将多克隆抗体作为捕获抗体偶联至纳米级羧基聚合物磁珠,以高碘酸钠法对单克隆抗体进行辣根过氧化物酶标记作为抗体探针,建立并优化基于纳米磁珠的双抗体夹心ELISA。结果获得一株具有良好特异性的抗AMH单克隆抗体,其亚型为IgG2b,纯化的多克隆抗体和单克隆抗体的效价均可达1∶51 200。与磁珠偶联后的捕获抗体以及酶标记后的探针抗体仍然具有较好的活性。建立的方法可在1 h左右检测出AMH抗原,检测下限在50 ng/mL左右。结论制备的AMH免疫磁珠能够用于重组AMH的检测,具有快速、可视化的优点。 

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 人AMH重组蛋白的诱导与纯化
        1.2.2 AMH多克隆抗体的制备及鉴定
        1.2.3 AMH单克隆抗体的制备及鉴定
        1.2.4 抗体纯化及其效价测定
        1.2.5 免疫磁珠的制备及验证
        1.2.6 酶标抗体的制备及其最佳工作浓度的确定
        1.2.7 快速检测方法的建立及其最佳反应时间
        1.2.8 灵敏度检测实验
2 结果
    2.1 人AMH重组蛋白的获得与鉴定
    2.2 小鼠多抗血清的鉴定
    2.3 单克隆抗体制备及其特性鉴定
    2.4 抗体的纯化与效价测定
    2.5 免疫磁珠与酶标抗体的鉴定
    2.6 最佳反应时间优化
    2.7灵敏度评价
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3726756