人卡他莫拉单克隆抗体胶体金试纸的制备及初步应用

发布时间：2023-02-10 16:40

　　目的制备抗UspA1蛋白单克隆抗体,研制能快速、灵敏、准确检测卡他莫拉菌的胶体金免疫层析试纸,以期用于人卡他莫拉菌的临床检测。方法将重组UspA1-His蛋白作为抗原,免疫小鼠,并制备单克隆抗体;通过Western blot技术以及免疫荧光技术鉴定抗体的特异性;以双抗体夹心的原理研制胶体金免疫层析检测试纸条,并对其特异性、敏感性及稳定性进行评价分析。结果筛选出两株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,经腹水制备纯化得到单克隆抗体,并验证了两种抗体均能特异性识别天然UspA1蛋白;利用双抗夹心原理制备的胶体金试纸能在10 min内快速检测卡他莫拉菌,检测灵敏度高(1×10⁵ CFU/ml)、特异性强,与其他常见9种的呼吸道病原菌诸如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、嗜肺军团菌等无交叉反应;试纸条在37℃保存有良好的重复性和稳定性;200份临床样品检测结果与平板培养法的阳性符合率为93.3%。结论本研究制备了特异性强的抗UspA1蛋白单克隆抗体;以此研制的胶体金免疫层析试纸可快速、简便、灵敏的检测卡他莫拉菌,适用于呼吸道感染的临床快速检测。

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【文章目录】：
材料与方法
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 主要设备、试剂
        1.3 实验动物
    2 方法
        2.1 抗UspA1蛋白单克隆抗体的制备
            2.1.1 动物免疫
            2.1.2 杂交瘤细胞株的制备
            2.1.3 腹水制备
        2.2 单克隆抗体特异性分析
            2.2.1 抗体亚型鉴定
            2.2.2 间接ELISA鉴定
            2.2.3 Western blot特异性鉴定
            2.2.4 单克隆抗体的特异性鉴定
        2.3 胶体金免疫层析试纸条的制备
            2.3.1 胶体金结合垫的制备
            2.3.2 检测线和质控线的包被
            2.3.3 免疫层析试纸条的组装
        2.4 测试方法与判定标准
        2.5 试纸条的质量测试
            2.5.1 特异性测试
            2.5.2 灵敏性测试
            2.5.3 稳定性和重复性测试
        2.6 试纸条的初步临床应用
结 果
    1 单克隆抗体的制备
    2 单克隆抗体特性鉴定
        2.1 亚型鉴定
        2.2 Western blot鉴定
        2.3 单克隆抗体特异性
    3 胶体金试纸的制备
        3.1 胶体金试纸的配对
        3.2 试纸条特异性测试
        3.3 灵敏性测试
        3.4 稳定性和重复性测试
        3.5 初步临床应用检测结果
讨 论



本文编号：3739531