结核分枝杆菌MPT64和PE35及PPE68基因多态性对其蛋白功能影响的初步研究

发布时间：2017-05-17 19:12

  本文关键词：结核分枝杆菌MPT64和PE35及PPE68基因多态性对其蛋白功能影响的初步研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：近年来,结核分枝杆菌T细胞抗原表位多态性分析发现,结核分枝杆菌的某些T细胞抗原表位是可变的,并提示有可能与结核分枝杆菌的免疫逃逸有关。MPT64, ESAT-6和CFP-10是结核分枝杆菌的三种重要分泌蛋白,在结核病的诊断及疫苗候选抗原方面有重要作用。我们的前期研究发现结核分枝杆菌MPT64基因具有高度多态性,而ESAT-6/CFP-10基因是保守的,但影响ESAT-6/CFP-10蛋白的PE35和PPE68两个基因的人类T细胞表位是高度可变的,提示这两种抗原很可能参与了结核分枝杆菌的免疫逃逸。然而,关于PE35和PPE68基因的多态性及对分泌蛋白ESAT-6/CFP-10的影响的研究较少。MPT64,是短期培养滤液中的主要成分,MPT64蛋白由人类Thl细胞识别,这对于结核病的诊断或是作为结核疫苗候选新抗原方面很有帮助。以往研究报道MPT64在不同的国家和地区均存在一定的基因多态性并会影响MPT64抗原的检测。为了进一步研究MPT64、PE35和PPE68基因多态性及其对结核分枝杆菌毒力和致病性的影响,以及由此可能引起的免疫逃逸的机制。我们选取了影响ESX-1分泌系统的基因PE35和PPE68及MPT64,同时选取影响ESX-1分泌系统的6个基因(Rv3870、Rv3877、Rv3616c、Rv3871、Rv3615c和Rv3849),研究基因多态性对分泌蛋白MPT64, ESAT-6/CFP-10及蛋白功能的影响。从菌株库选取161株菌,培养并提取DNA, PCR扩增,序列比对分析,分析目的基因的多态性；再选取有较大突变及可能对蛋白结构有影响的基因,通过比较突变株与野生株的蛋白表达水平或对检测试剂盒的影响,来初步研究这些基因对分泌蛋白功能的影响。结果显示在所选的基因中,影响ESX-1分泌系统的6个基因中,仅Rv3871基因有明显的突变,其余基因(Rv3870、Rv3877、Rv3616c、Rv3615c和Rv3849)经测序及比对分析,均无明显的基因多态性。Rv3871基因,6株有非同义突变,6株有同义突变,1株有3bp的缺失。而MPT64及PE35和PPE68基因存在较大改变,并可能引起相应蛋白结构的改变。在161株中13株表现有MPT64基因的多态性,8株菌有196-258位置63bp的缺失,4株菌有单位点的突变,一株有单位点的插入。对于PE35基因,23株显示有PE35基因多态性,这包括21株菌有A碱基缺失,另外2株有非同义突变；而PPE68基因,8株菌有PPE68基因多态性,包括2株有两种不同的缺失,6株显示有5种非同义突变。通过试剂盒检测发现,MPT64基因63bp缺失的突变株出现假阴性结果,而单位点的突变并未引起假阴性的结果；野生株均是阳性结果。虽然PE35和PPE68存在基因多态性及T细胞表位多态性,但PE35和PPE68基因多态性对ESAT-6/CFP-10蛋白无明显影响。结核分枝杆菌MPT64基因的多态性会对以检测MPT64的试剂盒产生影响,在我们的研究中,63bp缺失的突变会引起假阴性的结果。影响ESX-1分泌系统的PE35和PPE68基因存在多态性,然而对结核分枝杆菌主要毒力因子ESAT-6,CFP-10没有明显的影响。
【关键词】：结核分枝杆菌 PE35 PPE68 MPT64 基因多态性
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R378.911
【目录】：

• ABBREVIATION6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-16
• 材料和方法16-30
• 结果30-47
• 讨论47-54
• 结论54-55
• 参考文献55-61
• 综述61-78
• 参考文献68-78
• 致谢78-79
• 发表论文79

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本文编号：374269