改良组织块培养法体外培养人角膜上皮干细胞

发布时间：2023-02-19 14:24

　　背景:角膜上皮干细胞定位于角膜缘,又称之为角膜缘干细胞,临床上由于眼表严重热烧伤、化学性烧伤、慢性炎症等原因引起的角膜缘干细胞缺乏或功能障碍治疗较为棘手。目前利用组织工程技术体外培养角膜上皮干细胞并进行临床移植成为新型有效的治疗方向。目的:探讨在无血清培养条件下采用改良组织块培养法培养人角膜上皮干细胞的可行性。方法:人角膜缘组织来自河南省眼库,植片直径小于8mm角膜移植术后的供者剩余眼球材料,手术显微镜下剖取角膜缘上皮层外2/3区域,采用2种方法培养人角膜上皮干细胞,常规组织块培养组是将组织块上皮面向上贴壁,加入K-SFM培养液后置于37℃、体积分数为5%CO₂细胞培养箱中培养;改良组织块培养组是先将组织块浸泡于K-SFM培养液中,置于细胞培养箱中孵育12h,然后组织块上皮面向下贴壁培养。组织块周边有细胞游离出贴壁生长记作"培养第1天",每日相差显微镜下观察细胞生长变化。利用免疫荧光染色技术检测改良组织块培养第5,10,14天时原代细胞中p63及K3的表达。结果与结论:①改良组织块培养组出膜时间明显短于常规组织块培养组(P <0.05),出膜率明显高于常规组...

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【文章目录】：
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    1.1 设计
    1.2 时间及地点
    1.3 材料
        1.3.1 人角膜缘组织
        1.3.2 实验仪器及试剂
    1.4 实验方法
        1.4.1 取材
        1.4.2 两种组织块培养法的对比观察
        1.4.3 改良组织块培养组原代细胞的培养
        1.4.4 改良组织块培养组培养不同时间点K3、p63的表达
    1.5 主要观察指标
    1.6 统计学分析
2 结果Results
    2.1 常规组织块培养组和改良组织块培养组的出膜时间和出膜率以及细胞生长状态
    2.2改良组织块培养组原代细胞在不同时间点的形态
    2.3 改良组织块培养组原代细胞培养不同时间点K3、p63的表达
3 讨论Discussion



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