PTPN3在TGF-β信号通路中功能与机制的研究
发布时间：2023-03-04 10:16
作为生物体内极为重要的细胞因子,转化生长因子β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)调控了细胞增殖、分化、凋亡以及胚胎发育等一系列生理过程。经典的TGF-β信号通路起始于TGF-β配体结合受体,之后Ⅱ型受体磷酸化Ⅰ型受体招募并磷酸化受体调节型Smad(Receptor-activated Smad,R-Smad,如Smad2和Smad3);磷酸化后的 R-Smad 和通用转导型 Smad(Commonmediator Smad,Co-Smad,即Smad4)结合形成复合物入核,进而调控下游基因。TGF-p信号通路还受到抑制型 Smad(Inhibitory Smad,Ⅰ-Smad,即 Smad6 和 Smad7)负向调控,如 Smad7 可以招募E3连接酶Smurf2导致Ⅰ型受体降解从而抑制TGF-p信号通路。TGF-β信号通路的异常调控可能引发多种疾病,如免疫性疾病、组织纤维化、心血管疾病、胚胎发育异常和肿瘤等。TGF-β在癌症的发展过程中具有十分重要的双向调控作用。在癌症早期,TGF-β通过抑制增殖和诱导凋亡等起到抑癌作用;而在癌症发生晚期,TGF...
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
致谢
中文摘要
英文摘要
中英文缩写
1. 绪论
1.1. TGF-β信号通路
1.1.1. TGF-β信号通路概况
1.1.2. TGF-β信号通路配体
1.1.3. TGF-β信号通路受体
1.1.4. Smad蛋白
1.1.5. TGF-β不依赖于Smad蛋白信号通路
1.1.6. TGF-β信号通路功能
1.2. 蛋白质酪氨酸磷酸酶
1.2.1. 蛋白质酪氨酸磷酸酶的分类
1.2.2. 蛋白质酪氨酸磷酸酶的功能
1.3. PTPN3
1.3.1. PTPN3概况
1.3.2. PTPN3功能
2. 材料和方法
2.1. 材料
2.1.1. 细胞和菌株
2.1.2. 质粒
2.1.3. 抗体
2.1.4. 主要试剂
2.1.5. qRT-PCR引物
2.1.6. 仪器设备
2.1.7. 常规试剂配制
2.2. 实验方法与步骤
2.2.1. 细胞培养
2.2.2. 细胞转染
2.2.3. 慢病毒包装以及稳转细胞系的构建
2.2.4. siRNA干扰实验
2.2.5. MTS实验
2.2.6. 荧光素酶报告基因实验
2.2.7. 细胞RNA的提取
2.2.8. mRNA的逆转录
2.2.9. 荧光实时定量PCR
2.2.10. 质粒构建
2.2.11. 免疫荧光
2.2.12. 蛋白免疫印记实验
2.2.13. 免疫共沉淀实验
2.2.14. 细胞克隆形成实验
2.2.15. 裸鼠成瘤实验
2.2.16. 数据统计
3. 结果与分析
3.1. PTPN3促进TGF-β信号通路
3.1.1. PTPN3促进TGF-β信号通路诱导的报告基因活性
3.1.2. 敲减PTPN3降低TGF-β信号通路诱导的报告基因活性
3.1.3. 敲减PTPN3削弱TGF-β信号通路诱导的下游基因响应
3.1.4. PTPN3促进TGF-β信号通路诱导的下游基因响应
3.2. PTPN3促进TGF-β信号通路的分子机制
3.2.1. PTPN3促进TGF-β信号通路不依赖它的磷酸酶活性
3.2.2. L232R使PTPN3丧失促进TGF-β信号通路的作用
3.2.3. PTPN3能够稳定TβRI蛋白表达
3.2.4. PTPN3降低TβRI泛素化
3.2.5. PTPN3阻滞Smurf2诱导的TβRI降解
3.2.6. PTPN3削弱Smurf2和TβRI相互作用
3.3. PTPN3对于TGF-β信号通路功能的调控
3.3.1. PTPN3增强TGF-β的生长抑制功能
3.3.2. 敲减PTPN3削弱TGF-β信号通路诱导的生长抑制反应
3.3.3. 敲减PTPN3削弱TGF-β信号通路的肿瘤抑制功能
3.3.4. 敲减PTPN3抑制TGF-β诱导的EMT
3.3.5. PTPN3促进TGF-β信号通路的工作模型
4. 讨论
参考文献
作者简介
本文编号：3754098
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
致谢
中文摘要
英文摘要
中英文缩写
1. 绪论
1.1. TGF-β信号通路
1.1.1. TGF-β信号通路概况
1.1.2. TGF-β信号通路配体
1.1.3. TGF-β信号通路受体
1.1.4. Smad蛋白
1.1.5. TGF-β不依赖于Smad蛋白信号通路
1.1.6. TGF-β信号通路功能
1.2. 蛋白质酪氨酸磷酸酶
1.2.1. 蛋白质酪氨酸磷酸酶的分类
1.2.2. 蛋白质酪氨酸磷酸酶的功能
1.3. PTPN3
1.3.1. PTPN3概况
1.3.2. PTPN3功能
2. 材料和方法
2.1. 材料
2.1.1. 细胞和菌株
2.1.2. 质粒
2.1.3. 抗体
2.1.4. 主要试剂
2.1.5. qRT-PCR引物
2.1.6. 仪器设备
2.1.7. 常规试剂配制
2.2. 实验方法与步骤
2.2.1. 细胞培养
2.2.2. 细胞转染
2.2.3. 慢病毒包装以及稳转细胞系的构建
2.2.4. siRNA干扰实验
2.2.5. MTS实验
2.2.6. 荧光素酶报告基因实验
2.2.7. 细胞RNA的提取
2.2.8. mRNA的逆转录
2.2.9. 荧光实时定量PCR
2.2.10. 质粒构建
2.2.11. 免疫荧光
2.2.12. 蛋白免疫印记实验
2.2.13. 免疫共沉淀实验
2.2.14. 细胞克隆形成实验
2.2.15. 裸鼠成瘤实验
2.2.16. 数据统计
3. 结果与分析
3.1. PTPN3促进TGF-β信号通路
3.1.1. PTPN3促进TGF-β信号通路诱导的报告基因活性
3.1.2. 敲减PTPN3降低TGF-β信号通路诱导的报告基因活性
3.1.3. 敲减PTPN3削弱TGF-β信号通路诱导的下游基因响应
3.1.4. PTPN3促进TGF-β信号通路诱导的下游基因响应
3.2. PTPN3促进TGF-β信号通路的分子机制
3.2.1. PTPN3促进TGF-β信号通路不依赖它的磷酸酶活性
3.2.2. L232R使PTPN3丧失促进TGF-β信号通路的作用
3.2.3. PTPN3能够稳定TβRI蛋白表达
3.2.4. PTPN3降低TβRI泛素化
3.2.5. PTPN3阻滞Smurf2诱导的TβRI降解
3.2.6. PTPN3削弱Smurf2和TβRI相互作用
3.3. PTPN3对于TGF-β信号通路功能的调控
3.3.1. PTPN3增强TGF-β的生长抑制功能
3.3.2. 敲减PTPN3削弱TGF-β信号通路诱导的生长抑制反应
3.3.3. 敲减PTPN3削弱TGF-β信号通路的肿瘤抑制功能
3.3.4. 敲减PTPN3抑制TGF-β诱导的EMT
3.3.5. PTPN3促进TGF-β信号通路的工作模型
4. 讨论
参考文献
作者简介
本文编号：3754098
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/3754098.html
教材专著
